BLyS拮抗劑及BLyS突變體研究.pdf

1、B淋巴細胞刺激因子（BLyS）對B細胞的平衡和免疫球蛋白的分泌具有重要的作用。BLyS行使相應(yīng)的功能是通過和其三個受體的結(jié)合來實現(xiàn)的，經(jīng)過一系列信號傳遞，實現(xiàn)基因的表達與調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)BLyS的過度表達會引起一系列的自身免疫疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和干燥綜合征等。所以，以BLyS為靶點阻斷或減弱BLyS的活性來治療自身免疫疾病成為了新的研究熱點。
　　我們前期通過計算機輔助設(shè)計的方法獲得了BLyS拮抗肽BC、TA，并將其

2、和人IgG1 Fc片段連接來維持結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，形成融合蛋白BC-Fc、TA-Fc。同時構(gòu)建了BC-Fc的優(yōu)化融合蛋白BP-Fc(BC-Fc無His標簽)、3-BC-Fc（三個拷貝的BC和Fc連接）。另外，我們將噬菌體庫篩選的BLyS拮抗肽814和Fc連接形成814-Fc融合蛋白。本論文中，在之前研究的基礎(chǔ)上對上述融合蛋白進行活性比較和位點分析；利用基因工程技術(shù)構(gòu)建了新的融合基因 pET30a-814-TA-Fc和 pET30a-814-

3、BC-Fc，原核系統(tǒng)表達融合蛋白，純化后進一步對其進行活性分析；構(gòu)建了BLyS突變基因并對表達的突變體蛋白活性進行了初步的檢測。
　　具體研究結(jié)果如下：
　　1.純化了BC-Fc、BP-Fc、3-BC-Fc和814-Fc融合蛋白，直接ELISA比較這些蛋白活性的結(jié)果顯示，結(jié)合BLyS活性814-Fc最好，3-BC-Fc、BP-Fc、BC-Fc依次次之；競爭ELISA結(jié)果顯示，競爭活性814-Fc最好，BC-Fc、3-BC-F

4、c、BP-Fc依次次之。
　　2.814肽和BP-Fc融合蛋白競爭結(jié)合BLyS結(jié)果顯示，肽BC和814具有相同的BLyS結(jié)合位點，但是具有不同的空間結(jié)合方向。
　　3.構(gòu)建并得到了序列完全正確的pET30a-814-TA-Fc和 pET30a-814-BC-Fc重組載體，利用 Protein A柱純化得到了融合蛋白，ELISA結(jié)果顯示814-TA-Fc和814-BC-Fc均能夠結(jié)合BLyS，但結(jié)合活性低于814-Fc。