不同來源的BLyS結(jié)合肽及其肽抗體在BLyS拮抗劑方面的應(yīng)用.pdf

1、在有效治療自身免疫性疾病的探索中，B淋巴細(xì)胞刺激因子（BLyS）正成為引人注目的治療靶點(diǎn)。BLyS，作為腫瘤壞死因子（TNF）超家族的成員之一，在B淋巴細(xì)胞增殖、分化、成熟及穩(wěn)態(tài)平衡過程中扮演著至關(guān)重要的調(diào)控者。這依賴于BLyS與受體的相互作用及多種信號的傳遞。研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)的BLyS可導(dǎo)致系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、B細(xì)胞腫瘤等疾病的發(fā)生。因此，多種類型的BLyS拮抗劑已成為自身免疫性疾病臨床研究的熱點(diǎn)。
　　據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，

2、噬菌體展示肽庫技術(shù)篩選出的肽814、219具有BLyS親和性。我們依據(jù)B LyS-TAC I作用復(fù)合物的空間結(jié)構(gòu)，通過計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)獲得了肽3-TA、3-TC。為保持這些短肽的空間結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性，將人IgG1 Fc片段與肽基因重組形成肽-Fc融合蛋白，即一種新型的肽抗體。對不同來源的肽及肽抗體進(jìn)行活性分析，檢測其成為BLyS拮抗劑的可行性。具體結(jié)果如下：
　　1.融合基因pET30a-814-Fc、pET30a-219-Fc被構(gòu)

3、建并表達(dá)。肽抗體814-Fc能顯著抑制BLyS-TACI的相互作用，抑制活性與肽814相當(dāng)。
　　2．融合基因pET30a-3-TA-Fc、pET30a-3-TC-Fc被構(gòu)建并表達(dá)。相比于單拷貝肽的融合蛋白TA-Fc、TC-Fc，3-TA-Fc、3-TC-Fc對BLyS的親和性有所增強(qiáng)。
　　3．融合蛋白814-Fc、TA-Fc是二聚體結(jié)構(gòu)。814、814-Fc的拮抗活性是TA、TA-Fc的兩倍。同時(shí)，814、TA與BLyS