家蠶吡哆醛激酶基因定點突變及突變體功能研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩44頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、維生素B6(VB6)是一類吡啶化合物的總稱,游離型為吡哆醇(pyridoxine,PN)、吡哆醛(pyridoxal,PL)和吡哆胺(pyridoxamine,PM),對應(yīng)的磷酸酯型為磷酸吡哆醇(pyridoxine-5-phosphate,PNP)、磷酸吡哆醛(pyridoxal-5-phosphate,PLP)和磷酸吡哆胺(pyridoxamine-5-phosphate,PMP),其中PLP是VB6的主要輔酶形式,參與氨基酸代謝的

2、各種反應(yīng)。吡哆醛激酶(pyridoxal kinase,PL 激酶)是VB6 代謝途徑中的關(guān)鍵酶,在金屬陽離子和ATP 存在下,催化PN、PL和PM分別形成PNP、PLP和PMP。PL 激酶與磷酸吡哆醇氧化酶、磷酸酶一起維持細胞內(nèi)PLP 濃度穩(wěn)定,在VB6 代謝中發(fā)揮重要作用。
   家蠶(Bombyx mori)是蠶絲生產(chǎn)的重要經(jīng)濟昆蟲,VB6 對蠶體氨基酸代謝、脂肪酸代謝以及轉(zhuǎn)氨酶活力的影響較大。家蠶發(fā)育過程中,伴隨著蛋白質(zhì)

3、短期內(nèi)的大量降解和合成。當(dāng)家蠶絲腺快速合成絲蛋白時,需要供給大量的氨基酸。桑葉蛋白質(zhì)中富含谷氨酸和天冬氨酸,轉(zhuǎn)氨基作用在絲蛋白的合成過程中尤為顯著。
   PL 激酶是家蠶VB6 轉(zhuǎn)換代謝的關(guān)鍵酶,關(guān)系到絲蛋白合成的聯(lián)動調(diào)解機制。
   近幾年,本實驗室對家蠶PL 激酶進行cDNA克隆、原核表達并初步分析了酶學(xué)性質(zhì)。前期研究克隆出家蠶吡哆醛激酶cDNA,經(jīng)序列比對發(fā)現(xiàn)幾個重要且保守的氨基酸殘基在此蛋白中被替換。為明確家蠶

4、PL 激酶分子若干特定位置上的氨基酸殘基在酶活性功能上的作用進行本研究。采用重疊延伸法對家蠶PL 激酶Thr47,Asn121,Ile54,Arg88和Trp230 氨基酸殘基進行定點突變,構(gòu)建表達載體pET-22b-PL 激酶并轉(zhuǎn)入Escherichia coli Rosetta中進行誘導(dǎo)表達,經(jīng)親和層析對重組蛋白進行純化,通過酶活力檢測進行功能鑒定。家蠶PL 激酶Thr47、Ile54和Arg88 氨基酸殘基突變后酶催化活力分別下降

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論