疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶的固定化及其催化性能的研究.pdf

1、疏棉狀噬熱絲孢菌（Thermomyces lanuginosus）脂肪酶，以下簡稱TL酶，是一種嗜堿并具有很好熱穩(wěn)定性的酶，商品化的有液體酶和固定化酶。游離酶穩(wěn)定性差，容易失去活性，不能重復(fù)利用，商品化的固定化酶則喪失了Sn-1，3專一性。因此，通過固定化技術(shù)提高酶的穩(wěn)定性、重復(fù)利用率以及保留酶原有的位置專一性受到了極大的關(guān)注。
　　本論文首先在單相體系中，以磁性顆粒為載體采用共價法、以白炭黑和樹脂為載體均分別采用吸附法和吸附．交

2、聯(lián)法對TL酶進(jìn)行固定化。以固定化酶70℃催化大豆油和極度氫化大豆油反應(yīng)的酯交換活力作為酶固定化效果評價指標(biāo)，選擇了固定化效果較好的載體和方法:樹脂WR-6，吸附．交聯(lián)法。進(jìn)一步研究得到最佳的固定化條件為:吸附時間1h，酶液與載體的比例(V/W)為1.5∶1，溫度35℃，交聯(lián)劑濃度(V/V)0.15％，交聯(lián)時間3h，環(huán)境pH6.7。同時發(fā)現(xiàn)WR-6為載體吸附-交聯(lián)法固定化TL酶(WR-6-TL1)具有很強(qiáng)的熱穩(wěn)定性和儲藏穩(wěn)定性。
　

3、　隨后在雙相體系中以WR-6樹脂為載體對TL酶采用吸附法和吸附．交聯(lián)法進(jìn)行固定化，發(fā)現(xiàn)雙相體系和表面活性劑的加入可以提高固定化酶的酯交換活力。并詳細(xì)地研究了表面活性劑的種類和數(shù)量以及有機(jī)溶劑的種類對固定化效果的影響，發(fā)現(xiàn)Tween20的效果最好，其最佳的添加量為100 mg/g載體，有機(jī)溶劑的種類不同對固定化效果沒有太大的影響。在雙相體系中固定化的TL酶(WR-6-TL2)也具有很好的熱穩(wěn)定性和儲藏穩(wěn)定性。
　　將自制的固定化TL

4、酶、諾維信公司生產(chǎn)的商品固定化脂肪酶TL IM和RM IM應(yīng)用到母乳替代物1，3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯（1，3-dioleoyl-2-palmitoyl glycerol，OPO）的合成中。對反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行純化，并分析其脂肪酸組成、二位脂肪酸組成以及甘三酯組成，計(jì)算二位插入率。以二位插入率和甘三酯組成中OPO的含量為指標(biāo)考察固定化TL酶的Sn-1，3專一性，并與商品化TL IM和RM IM專一性進(jìn)行比較。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)TL IM和以白炭

5、黑為載體的固定化TL酶(F270-TL)沒有Sn-1，3專一性，而WR-6-TL1和WR-6-TL2的Sn-1，3專一性均高于RM IM。其催化產(chǎn)物甘三酯中OPO的含量分別可達(dá)29.8％和28.4％，并且WR-6-TL1和WR-6-TL2的Sn-1，3專一性具有很好的使用穩(wěn)定性。
　　最后將游離酶和固定化酶進(jìn)行紅外掃描，利用Peakfit v4.12軟件對酰胺Ⅰ帶進(jìn)行擬合，考察固定化前后酶分子二級結(jié)構(gòu)的變化，對固定化機(jī)理進(jìn)行了探討