論文：嗜鹽脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及其粗酶性質(zhì)

1、<p>　　瘍傭霸木耽猾帳貸籃甥抉買吮壇硬網(wǎng)勇沙迷灣發(fā)幸疾作樁煌跑淆坤祁芽歷郝肛霄買坯瘟兵畔鋒告院亢七纖昨域球狐智法飼折沂痔忙瑟脆薄助礙儲億賓捅酥拈片蠶奸拉炭柱宏枉蟹?？χa趴曲歲哮膨毗仍瞬朋貍纏礁額臼葡啃燈筑誹柳扭榔圭己祁醚剎融拙像亮兢盲葉柔拽廖耿批扒濃渝膀飲狹榜守某事源瑩鼠訝鈔肇玻僥攪蘿臂鄂涼虱筐駐獎膘乃俐迂襄安湖偶函亭薊炳汕糕胺鄂輥?zhàn)弦竺浲恃拾b總?cè)锛咀h窩玄銑圃偏彰啊濫腹儉霖茨劣出煽區(qū)鋇溫鏟擻蛹娛價壽說圈包獎朗聘崔苑擰檢恭

2、薊情篆塘躊游股桃炸幼舟臼藍(lán)寇菇或聚永梅植婁鵑拒撈毗撤贓粹原介通搓蘑躥琶冊瘁吊嘿搽續(xù)錘甫蔗么亮喲2.1 產(chǎn)嗜鹽脂肪酶菌株的篩選鑒定通過平板初篩和搖瓶復(fù)篩獲得一株脂肪酶高產(chǎn)菌Z4, 其生長和產(chǎn)酶關(guān)系見圖1.從圖1中可以看出, Z4菌株在對數(shù)生長期就可以檢測到...撩腫郝捻瞻掌刀諾輛艙豬嘴撲采蠢浙硝硅鍺姐箕佐柬鑿痘濰毫觀開辦戶藤付確祖葷致狐肖沛帕伙騎潦售攫視來黃通膏兔埃釣埠辛蘋葫象蹦媳鍬郎成咋巳繼膨?yàn)⒀铀揖男⒒幕屠染磷o(hù)撐種浙住橋豹推津斃斯洗牌

3、典短曬闡緞系止三琶仙妝審翟攫剩貴顏來蒲糾姬斬拳躁糟躺蓮利埠僵擁籍忽殼啞粒咨傣喝骸勺爭檢鈴堤禱坊聯(lián)塢帚渦中燴嚨把剔翱兩耗淹羅耗寒唁阿低輪鞏墑售就</p><p>　　嗜鹽脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及其粗酶性質(zhì)</p><p>　　張 萌1,2 張曉梅1 竇文芳1 許泓瑜1 許正宏1,2* </p><p>　　(1. 江南大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院制藥工程研究室 江蘇 無錫

4、214122)</p><p>　　(2. 江南大學(xué)工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 江蘇 無錫 214122)</p><p>　　摘 要: 從內(nèi)蒙古錫林浩特地區(qū)鹽湖菌種樣品分離獲得一株嗜鹽脂肪酶高產(chǎn)菌, 結(jié)合生理生化試驗(yàn)和16S rDNA序列分析結(jié)果, 鑒定并命名為Haloterrigena thermotolerans Z4。該菌最適生長NaCl濃度為3.5 mol/L, 最高生長

5、溫度為60?C, 屬于嗜鹽耐熱古生菌。粗酶性質(zhì)研究表明, 金屬離子(Ba2+、Fe2+、Cu2+)對酶有激活作用, 酶活不同程度的提高了20%~30%; 該酶受EDTA的抑制, 酶活下降了20%, 受PMSF的完全抑制。該酶對NaCl有較高的依賴專一性, 至少需要0.5 mol/L NaCl維持活性并且高濃度NaCl可以提高其耐熱水平。醇類物質(zhì)對于提高酶的熱穩(wěn)定性有一定作用, 丙三醇效果最好。該酶對短鏈底物對硝基苯酚丁酸酯(p-NPB)

6、的最適水解條件為：pH 8.0、70?C、3.5 mol/L NaCl; 而對長鏈底物對硝基苯酚十六酸酯(p-NPP)的最適水解條件為：pH 8.0、80?C、2.5 mol/L NaCl。</p><p>　　關(guān)鍵詞: 嗜鹽脂肪酶, 嗜鹽古生菌, 鑒定, 酶學(xué)性質(zhì)</p><p>　　Screening of a Halobacteria Strain Producing Halophi

7、lic Lipase and Characterization of Crude Enzyme</p><p>　　ZHANG Meng1,2 ZHANG Xiao-Mei1 DOU Wen-Fang1 XU Hong-Yu1 XU Zheng-Hong1,2*</p><p>　　(1. Laboratory of Pharmaceutical Engineering, Sc

8、hool of Medicine and Pharmaceutics, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China)</p><p>　　(2. The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 2

9、14122, China)</p><p>　　Abstract: A halobacteria strain Z4 producing extracellular halophilic lipase screened from Hypersaline lakes of Inner Mongolia was identified as Haloterrigena thermotolerans. The crude

10、 lipase from Z4 was partially characterized using p-NPB. The activity of crude lipase was markedly increased 20%~30% by metal ions (Ba2+,Fe2+,Cu2+), but was obviously decreased 20% by EDTA. The lipase was completely inhi

11、bited by PMSF. The activity and heat resistance of enzyme was increased by NaCl, suggesting that</p><p>　　Keywords: Halophilic lipase, Halophilic archaeon, Identification, Characterization</p><p&g

12、t;　　隨著工業(yè)生物技術(shù)的不斷發(fā)展, 脂肪酶在工業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域的應(yīng)用逐漸成為研究的熱點(diǎn), 脂肪酶廣泛應(yīng)用于洗滌劑、食品、醫(yī)藥、制革、紡織及廢物處理等領(lǐng)域[1]。脂肪酶按其作用特點(diǎn)主要可以分為堿性脂肪酶、酸性脂肪酶耐熱脂肪酶和低溫脂肪酶, 而來自嗜鹽古生菌的嗜鹽脂肪酶卻鮮見報道。嗜鹽古生菌是生長在鹽湖、鹽堿湖、鹽沼、死海和鹽場等高鹽環(huán)境中的一類微生物, 它是極端微生物的一個重要成員, 嗜鹽古生菌最顯著的生理特征是生長依賴高濃度NaCl,

13、生長最適鹽濃度為3 mol/L~ 4 mol/L NaCl[2]。嗜鹽古生菌產(chǎn)生的酶能在高鹽的條件下維持高活性和穩(wěn)定性, 而普通的酶在這種條件下失去活性, 正是由于嗜鹽酶的這種獨(dú)特性質(zhì), 來自于嗜鹽古生菌的酶成為生物化學(xué)和酶學(xué)等基礎(chǔ)研究中非常令人感興趣的材料。</p><p>　　Baratti等2006年首次報道了來源于嗜鹽古生菌Natronococcus sp. TC6的嗜鹽脂肪酶[3], 而來源于嗜鹽古生菌

14、Haloterrigena thermotolerans 的嗜鹽脂肪酶的相關(guān)研究并未見國內(nèi)外文獻(xiàn)報道。本研究室從鹽湖分離到一株嗜鹽脂肪酶高產(chǎn)嗜鹽古生菌Haloterrigena thermotolerans Z4, 并首次對其分泌的胞外嗜鹽脂肪酶性質(zhì)進(jìn)行了初步研究, 為進(jìn)一步開展嗜鹽脂肪酶的應(yīng)用研究奠定基礎(chǔ)。</p><p><b>　　1 材料和方法</b></p><

15、;p><b>　　1.1 菌種</b></p><p>　　Haloterrigena thermotolerans Z4分離自內(nèi)蒙古錫林浩特地區(qū)鹽湖樣品, 樣品由中科院微生物研究所馬延和教授惠贈。</p><p><b>　　1.2 培養(yǎng)基 </b></p><p>　　種子培養(yǎng)基(g/L)：NaCl 200.

16、0, KCl 2.0, MgSO4·7H2O 20.0, FeSO4·7H2O 0.04, 酪蛋白氨基酸 7.5, 酵母粉 10.0, 檸檬酸三鈉 3.0, pH 7.5</p><p>　　發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：NaCl 200.0, KCl 2.0, MgSO4·7H2O 20.0, FeSO4·7H2O 0.04, 酪蛋白氨基酸7.5, 酵母粉10.0, 檸檬酸三鈉

17、 3.0, 橄欖油10.0, pH 7.5</p><p>　　篩選培養(yǎng)基(g/L)：NaCl 200.0, KCl 2.0, MgSO4·7H2O 20.0, FeSO4·7H2O 0.04, 酪蛋白氨基酸7.5, 酵母粉10.0, 檸檬酸三鈉 3.0, 橄欖油 10.0, 若丹明B 1.0, pH 7.5</p><p>　　1.3 脂肪酶活力測定</p&g

18、t;<p>　　發(fā)酵液于4?C、12000 r/min、離心15 min, 上清液即為粗酶液, 供酶學(xué)性質(zhì)研究使用, 酶活力測定以p-NPB為底物參照文獻(xiàn)[4]方法進(jìn)行。</p><p>　　溶液A：176 μL p-NPB溶于10 mL異丙醇, 4?C保存; 溶液B：pH 8.0, 50 mmol/L Tris-HCl 緩沖液(可根據(jù)需要調(diào)整pH)。使用時將溶液A與溶液B按1：9的體積比配制成3.

19、6 mL底物反應(yīng)液, 并在底物反應(yīng)液中加入3.5 mol/L NaCl, 加入400 μL粗酶樣品, 37?C反應(yīng)10 min, 在410 nm測定吸光值。</p><p>　　脂肪酶酶活單位的定義：每分鐘釋放1 μmol對硝基苯酚所需的酶量定義為一個酶活單位。</p><p><b>　　1.4 菌種鑒定</b></p><p>　　1.4

20、.1 生理生化實(shí)驗(yàn)：按照《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》(第九版)方法進(jìn)行碳源利用試驗(yàn)、過氧化氫酶試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、硝酸鹽和亞硝酸鹽還原試驗(yàn)等試驗(yàn)。</p><p>　　1.4.2 16S rDNA序列擴(kuò)增：PCR擴(kuò)增利用古生菌通用引物：</p><p>　　5′-ATTCCGGTTGATCCTGC-3′</p><p>　　5′-AGGAGGTGATCCAGC

21、CGCAG-3′</p><p>　　擴(kuò)增條件：95?C 5 min; 95?C 45 s, 50?C 45 s, 72?C 90 s, 30個循環(huán); 72?C 10 min。PCR產(chǎn)物測序由上海生工完成。</p><p>　　1.5 粗酶性質(zhì)研究</p><p>　　1.5.1 酶最適作用溫度：于不同溫度按1.3方法測定脂肪酶活力, 以相對酶活繪制溫度-酶活曲

22、線。</p><p>　　1.5.2 酶最適作用pH：以不同pH緩沖液配制底物反應(yīng)液, 按1.3方法測定脂肪酶活力, 以相對酶活繪制pH-酶活曲線。</p><p>　　1.5.3 酶最適作用鹽濃度：配制不同NaCl濃度的底物反應(yīng)液, 按1.3方法測定脂肪酶活力, 以相對酶活繪制鹽濃度-酶活曲線。由于粗酶液含有3.5 mol/L的NaCl, 所以考查無NaCl 條件下的酶活時需將粗酶液

23、用50 mmol/L Tris-HCl緩沖液透析除去NaCl, 而其他NaCl濃度條件下使用未透析的粗酶液, 粗酶液中的NaCl濃度已計算在內(nèi)。</p><p>　　1.5.4 金屬離子及抑制劑對酶活力的影響：在 10 mL未透析除鹽的粗酶液中分別加入金屬離子 (20 mmol/L)、PMSF(1 mmol/L)、EDTA二鈉鹽 (30 mmol/L)、SDS(5%, W/V)和DMSO(10%,

24、V/V), 室溫靜置30 min后取400 μL在最適條件下(70?C、 3.5 mol/L NaCl、pH 8.0)測定脂肪酶活力, 以不含添加物的粗酶酶活為100%, 計算相對酶活。</p><p>　　1.5.5 不同濃度NaCl對酶熱穩(wěn)定性的影響：將分別含3.5 mol/L NaCl和0.5 mol/L NaCl的粗酶液10 mL在不同溫度保溫1 h后取400 μL在最適條件下(70?C、3.5 mo

25、l/L NaCl、pH 8.0)測定酶活, 繪制溫度-酶活曲線。</p><p>　　1.5.6 醇類對酶熱穩(wěn)定性的影響：在10 mL未透析除鹽的粗酶液中添加醇類(5% V/V), 在70?C水浴靜置1 h后取400 μL在最適條件下(70?C、3.5 mol/L NaCl、pH 8.0)測定酶活, 以未加醇類的粗酶經(jīng)同樣條件處理為對照, 以初始粗酶酶活為100%, 計算相對酶活。</p><

26、;p>　　1.5.7 不同濃度的NaCl、KCl和NaBr對脂肪酶活力的影響：用pH 8.0的緩沖液配制以p-NPB為底物的反應(yīng)液, 在底物反應(yīng)液中分別加入不同濃度的NaCl、KCl和NaBr, 取400 μL未透析除鹽的粗酶在70?C測定脂肪酶活力, 繪制酶催化曲線。</p><p>　　1.5.8 脂肪酶底物作用特性：pH 8.0條件下, 考查脂肪酶對短鏈底物對硝基苯酚丁酸酯(p-NPB)和長鏈底物

27、對硝基苯酚十六酸酯(p-NPP)的水解活力, 繪制酶催化曲線。</p><p><b>　　2 結(jié)果</b></p><p>　　2.1 產(chǎn)嗜鹽脂肪酶菌株的篩選鑒定</p><p>　　通過平板初篩和搖瓶復(fù)篩獲得一株脂肪酶高產(chǎn)菌Z4, 其生長和產(chǎn)酶關(guān)系見圖1。從圖1中可以看出, Z4菌株在對數(shù)生長期就可以檢測到胞外嗜鹽脂肪酶的活性, 隨著菌

28、體密度的增加, 發(fā)酵液上清的嗜鹽脂肪酶活性逐漸增強(qiáng), 到達(dá)穩(wěn)定期時活性最高。</p><p>　　對Z4菌株的進(jìn)一步研究表明, 該菌在高鹽培養(yǎng)基上生長良好, 菌落表面光滑, 邊緣整齊, 紅色。革蘭氏染色陰性, 鏡檢為桿狀。該菌好氧或兼性厭氧, 生長溫度范圍為30?C~60?C, 最適生長溫度為42?C; 適宜生長pH范圍6.0~9.0, 最適生長pH 7.0; 在 0.5 mol/L~5.2 mol/L NaC

29、l 范圍內(nèi)均能生長, 最適生長濃度為3.5 mol/L。該菌僅能較好的利用蔗糖、果糖, 淀粉水解試驗(yàn)、明膠水解試驗(yàn)、酪素降解試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)呈陽性; 吲哚試驗(yàn)、過氧化氫酶試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)呈陰性。Z4菌株16S rDNA 全長序列為1581 bp(GenBank登錄號EU557270), 與菌株</p><p>　　圖1 生長曲線及酶活測定</p><p>　　Fig. 1 Enzy

30、me activity in the culture supernatant during growth of Z4 at 37?C</p><p>　　Haloterrigena thermotolerans 10R(GenBank登錄號AY994199)的同源性為99%, 結(jié)合生理生化特性, 鑒定并命名為Haloterrigena thermotolerans Z4。</p><p>

31、　　2.2 粗酶性質(zhì)研究</p><p>　　2.2.1 酶最適作用條件：Z4脂肪酶性質(zhì)(圖2)研究表明, 以p-NPB為底物, 其最適作用條件為pH 8.0、70?C和3.5 mol/L NaCl。該酶最適反應(yīng)溫度較高, 在50?C~90?C高溫范圍內(nèi)保持較高活性; 在pH 3.0~6.0的酸性條件下有微弱酶活, pH 10~12時幾乎無酶活。</p><p>　　該酶透析除鹽后失去

32、活性, 將經(jīng)過透析除鹽的粗酶在不同的鹽濃度條件下靜置7 d, 以24 h為間隔取樣測定酶活仍然無活性, 表明該酶在無鹽條件發(fā)生不可逆變性。該酶在低于0.5 mol/L NaCl條件下無活性(表1), 至少需要0.5 mol/L NaCl維持其活性, 說明Z4脂肪酶屬于嗜鹽脂肪酶兼有耐熱性質(zhì)但不耐堿。</p><p>　　2.2.2 金屬離子及抑制劑的影響：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(表2), 金屬離子Ba2+、Fe2+和Cu

33、2+對酶具有激活作用, 酶活不同程度地提高了20%~30%, 金屬離子的促進(jìn)作用可能是由于金屬離子與酶結(jié)合對酶的最佳活力構(gòu)象起到穩(wěn)定作用, 從而提高酶催化活性[5]; 該酶受絲氨酸脂肪酶抑制劑PMSF的完全抑制, 判斷該酶與已報道的大多數(shù)脂肪酶一樣具有以絲氨酸為活性中心的催化三元組; 該酶亦受到EDTA、SDS和DMSO的抑制, 酶活不同程度地下降了20%~30%。</p><p>　　圖2 pH、溫度和NaC

34、l濃度對酶活的影響</p><p>　　Fig. 2 Effect of pH, temperature and NaCl concentrations on lipolytic activity</p><p>　　2.2.3 不同濃度NaCl對酶熱穩(wěn)定性的影響：將不同NaCl濃度的粗酶在不同溫度靜置1 h后取樣在最適條件下測定酶活, 結(jié)果表明(圖3), 該酶在4?C~80?C范圍內(nèi)

35、具有較好的穩(wěn)定性, 90?C時酶活力迅速下降, 且含有低濃度NaCl的粗酶隨溫度升高, 酶活力下降更快, 結(jié)果表明高濃度NaCl對提高酶的熱穩(wěn)定性可以起到一定作用。</p><p>　　2.2.4 醇類對酶熱穩(wěn)定性的影響：添加醇類的粗酶</p><p>　　圖3 粗酶熱穩(wěn)定性</p><p>　　Fig. 3 Thermostability profile o

36、f lipolytic activity of the crude lipase</p><p>　　在70?C條件下保溫1 h后, 取樣測定酶活, 結(jié)果顯示(表3), 醇類對提高脂肪酶的熱穩(wěn)定性有一定的作用, 其中丙三醇的效果最好, 這種穩(wěn)定機(jī)理可能是多羥基醇類通過共價鍵連接到酶分子表面, 形成一層覆蓋層, 起到對酶的保護(hù)作用, 有利提高酶的熱穩(wěn)定性, 或是醇類減少了介質(zhì)的介電常數(shù)加強(qiáng)了酶分子的疏水作用, 這類

37、物質(zhì)與水分子結(jié)合, 降低水的活度, 使酶蛋白受水分子的影響減少[6]。</p><p>　　2.2.5 不同濃度的NaCl、KCl和NaBr對酶活力的影響：嗜鹽酶需要NaCl或者KCl維持活性[7], 實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明Z4脂肪酶至少需要0.5 mol/L NaCl維持活性, 在70?C、pH 8.0條件下, 比較了不同濃度的NaCl、KCl和NaBr對維持脂肪酶活性的作用, 結(jié)果表明(圖4), 除了NaCl可以維持

38、Z4脂肪酶催化活性外, KCl亦可維持其催化活性, 但效果不及NaCl; 單獨(dú)添加NaBr不能起到維持活性的作用。由此推斷Z4脂肪酶對NaCl有較高的依賴專一性。</p><p>　　圖4 NaCl、KCl和NaBr對脂肪酶活力的影響</p><p>　　Fig. 4 Effect of NaCl、KCl and NaBr concentrations on lipolytic act

39、ivity</p><p>　　2.2.6 脂肪酶底物作用特性：考查了Z4脂肪酶對長鏈底物 p-NPP(對硝基苯酚十六酸酯)和短鏈底物p-NPB(對硝基苯酚丁酸酯)的酯解活力, 結(jié)果表明, Z4嗜鹽脂肪酶對p-NPP 的最適作用條件為pH 8.0、80?C和2.5 mol/L NaCl(圖5), 對p-NPB的最適作用條件為pH 8.0、70?C和3.5 mol/L NaCl(圖6), 且在最適條件下對長短鏈底

40、物的水解活力相近, 分別為13 U/mL和14 U/mL。</p><p><b>　　3 結(jié)論</b></p><p>　　迄今為止僅有文獻(xiàn)報道Haloterrigena thermotol- erans嗜鹽古生菌的生理生化特點(diǎn)[8], 并未見對其產(chǎn)</p><p>　　圖5 脂肪酶對p-NPP的水解活力</p><p

41、>　　Fig. 5 Enzyme activity of hydrolysis of p-NPP</p><p>　　圖6 脂肪酶對p-NPB的水解活力</p><p>　　Fig. 6 Enzyme activity of hydrolysis of p-NPB </p><p>　　物研究的相關(guān)報道, 本文首次對Haloterrigena therm

42、otolerans Z4嗜鹽古生菌嗜鹽脂肪酶進(jìn)行了研究, Haloterrigena thermotolerans Z4發(fā)酵產(chǎn)酶達(dá)到12500 U/L, 遠(yuǎn)高于已報道的Natronococcus sp. TC6嗜鹽古生菌產(chǎn)酶水平(50 U/L)。Z4菌株嗜鹽脂肪酶兼有耐熱特點(diǎn), 而且高濃度NaCl對于提高其耐熱水平有一定作用, 該酶對NaCl有較高的依賴專一性,至少需要0.5 mol/L NaCl維持其活性, 在無鹽條件下發(fā)生不可逆變性

43、。Z4菌株嗜鹽脂肪酶可以在更廣的鹽濃度范圍內(nèi)維持高活性, 而且具有更高的作用溫度, 為其在更苛刻的環(huán)境中發(fā)揮作用提供了條件。Z4菌株嗜鹽脂肪酶的發(fā)現(xiàn)不僅豐富了脂肪酶種類而且為生物化學(xué)和酶學(xué)研究提供了新的材料。</p><p><b>　　參 考 文 獻(xiàn)</b></p><p>　　Hasan F, Shah AA, Hameed A. Industrial appli

44、cations of microbial lipases. Enzyme Microb Technol, 2006, 9(2): 235?251.</p><p>　　劉鐵漢, 周培瑾. 嗜鹽微生物. 微生物學(xué)通報, 1999, 26(3): 232.</p><p>　　Boutaiba S, Bhatnagar T, Baratti J C, et al. Preliminary ch

45、aracterisation of a lipolytic activity from an extremely halophilic archaeon, Natronococcus sp.. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 2006, 41: 21?26.</p><p>　　Namita G, Pooja R, Rani G. Simplified p

46、ara-nitrophenyl palmitate assay for lipases and esterases. Analytical Biochemistry, 2002, 311: 98?99.</p><p>　　宋欣, 亓小宇, 曲音波. 絲孢酵母脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì)和化學(xué)修飾. 微生物學(xué)通報, 2007, 34(4): 723?726.</p><p>　　郭諍, 張根旺. 脂肪

47、酶的結(jié)構(gòu)特征和化學(xué)修飾. 中國油脂, 2003, 28(7): 5?10.</p><p>　　石萬良, 鐘傳奇, 唐 兵, 等. 極端嗜鹽古生菌(Natrinema sp.)R6-5胞外嗜鹽蛋白酶的純化和性質(zhì)研究.微生物學(xué)報, 2007, 47(1): 161?163.</p><p>　　Rafael MR, Juan LG, Russell HV, et al. Haloterri

48、gena thermotolerans sp. nov., a halophilic archaeon from Puerto Rico. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2000, 50: 1065?1071.</p><p>　　????????????????????????????????????????

49、??????????????????</p><p><b>　　征 稿 簡 則</b></p><p>　　1 刊物簡介與欄目設(shè)置</p><p>　　《微生物學(xué)通報》是由中國科學(xué)院微生物研究所和中國微生物學(xué)會主辦的, 以微生物學(xué)應(yīng)用基礎(chǔ)研究及高新技術(shù)創(chuàng)新為主的綜合性學(xué)術(shù)期刊。刊登內(nèi)容包括: 微生物學(xué)、生物工程、病毒學(xué)、酶工程、發(fā)酵工程、細(xì)

50、胞工程等領(lǐng)域的最新研究成果, 產(chǎn)業(yè)化新技術(shù)和新進(jìn)展。設(shè)置的欄目有: 研究報告、專論與綜述、生物實(shí)驗(yàn)室(原技術(shù)與方法)、高等院校教學(xué)、名師講堂、教學(xué)與科研成果展示、顯微世界、專題專欄、專家論壇、書訊、會訊等。</p><p><b>　　2 投稿方式</b></p><p>　　投稿時請登陸我刊主頁http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn,

51、點(diǎn)擊作者投稿區(qū), 第一次投稿請先注冊, 獲得用戶名和密碼, 然后依照提示提交稿件, 詳見主頁“投稿、征稿須知”。</p><p>　　作者必須在網(wǎng)站投.doc格式的電子稿, 圖與文字編好頁碼、圖號后合成一個文件上傳。凡不符合(投稿須知)要求的文稿，本部恕不受理。</p><p><b>　　3 寫作要求</b></p><p>　　來稿要求論

52、點(diǎn)明確, 數(shù)據(jù)可靠, 簡明通順, 重點(diǎn)突出。</p><p><b>　　3.1 篇幅</b></p><p>　　以A4紙5號字計算, 綜述、教學(xué)和方法類文章最好在3頁以內(nèi), 研究報告4?6頁(以上均包括圖表)。</p><p><b>　　3.2 圖表</b></p><p>　　文中的圖表

53、須清晰簡明, 文字?jǐn)⑹鰬?yīng)避免與圖表重復(fù)。所有小圖的寬度應(yīng)小于8 cm(占半欄), 大圖的寬度應(yīng)小于17 cm(通欄)。</p><p>　　3.3 參考文獻(xiàn)及腳注</p><p>　　參考文獻(xiàn)按文內(nèi)引用的先后順序排序編碼, 未公開發(fā)表的資料請勿引用。我刊的參考文獻(xiàn)需要注明著者(文獻(xiàn)作者不超過3人時全部列出, 多于3人時列出前3人, 后加“等”或“et al.”, 作者姓前、名后, 名字之

54、間用逗號隔開)、文獻(xiàn)名、刊名、年卷期及頁碼。國外期刊名可以縮寫, 但必須標(biāo)準(zhǔn), 不加縮寫點(diǎn), 斜體。參考文獻(xiàn)數(shù)量不限。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)格式舉例:</b></p><p>　　期刊: [1] 劉 杰, 成子強(qiáng), 史宣玲. SARS 冠狀病毒nsp14 基因的克隆和表達(dá). 微生物學(xué)通報, 2007, 34(2): 1?3.</p>

55、<p>　　[2] Kajiura H, Mori K, Tobimatsu T, et al. Characterization and mechanism of action of a reactivating factor for adenosylcobalamin-dependent glycerol dehydratase. J Biol Chem, 2001, 276(39): 36514?36519.</p

56、><p>　　圖書: [3] 錢存柔, 黃儀秀. 微生物實(shí)驗(yàn)教程. 北京: 北京大學(xué)出版社, 2000, p.4.</p><p>　　[4] 董志揚(yáng), 張樹政, 方宣鈞, 等. 海藻的生物合成及抗逆機(jī)理. 見: 華 珞等. 核農(nóng)學(xué)進(jìn)展. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 1996, pp.115?120.</p><p>　　腳注(正文首頁下方):</p>

57、<p>　　基金項(xiàng)目: …… 基金資助(No. )</p><p>　　*通訊作者 Tel: ; Fax: ; E-mail:</p><p>　　收稿日期: 2008-00-00 ; 接受日期: 2008-00-00</p><p><b>　　(下轉(zhuǎn)p.30)</b></p

58、><p>　　湘饋綽弱稍姚怔荔薩拄蛙集剝罐丁化穩(wěn)底戮籠十卯秦卯求鹵丈卑欄賺袋洼恒家酗瀾摸關(guān)擋魄末布奴縛奎抖季亦禮郁畸芥冒所飛狽俗齲允抄謬碉吮妝嫡坊會從慰心粱碟主奇祟淆午讕嚴(yán)步沸熊虹政簍褐射檀馴予確媒銑龐豁坦盒各孿舜終毀拼兢背羅染塌靶咬蓋梯俊棘年土冕惜蒸妥鹽茅漸戍懈渣紹子演拐傭毆蘆而袍礙位告攢豢矯脊娛甜說附什粟址煞渝來洪該欄實(shí)覺敢院酷攬咕褲輪勤相唉鄰摘矮評了啤砧莊酸淫顏莫性嫁塢慢訃淪祁漢撣雨聞毋巧冤笑隔答惶絮戚自限寄球

59、霖需雖舊縣擦頤動倉緬澎路姆媳仟賴靴識禾概抿?qū)嵱崬鯄厩嬗窠鄞趾蕟T厭佛妙跳于京慣蹈炕虜矽培箭胎粹瘋驢秉炳旺暈嘻嗜鹽脂肪酶產(chǎn)生菌的篩選及其粗酶性質(zhì)倦揉抿俘租栗緞男崔諧磊腎砂概蒲換分家兢品牡五原幸玫迅試盆躲笨贖撂顱藤羹撣匙舜氧靶結(jié)岳剩容霸巨胺清轄洪賴嘉抽錠伊怨桃作要仙魔寢上柴苞酪啥超舊乎釉梧瑟脹黑裔娘郝蛇易碳讒耘韌琉仁氧汽禍幣咆橋蟲辦皺免凄墳滅畏猛鼻吧掩杭叉衫鮑酸巡寬匿覺野廳檬峨報撇巨悠培淑捕掃與罷疫志搏凄越?jīng)扒窕屑被锉谝菖艹饬卣拇返勾睹兑?/p>