簡介：復旦大學博士學位論文大鼠前列腺癌細胞（RAT1）X線及重粒子（碳離子）照射放射生物學效應的實驗研究姓名來松濤申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師蔣國樑DURANTEMARCO20120406大鼠前列腺癌細胞RATIX線和重粒子碳離子照射放射生物學效應的實驗研究復旦大學博士學位論文第二部分大鼠前列腺癌細胞RAT1與正常腸上皮細胞IEC6照射后共培養(yǎng)的實驗研究目的研究接受光子射線和碳離子照射后的大鼠前列腺癌細胞RAT1與大鼠正常腸上皮細胞IEC6進行共同培養(yǎng)及兩種細胞之間的相互作用和影響。材料與方法實驗中使用兩種不同的乏氧裝置乏氧培養(yǎng)箱和乏氧照射盒。準備處于對數(shù)生長期的大鼠前列腺癌細胞RAT一1，分別進行慢性乏氧O5％氧濃度，24小時和／或急性乏氧O5％氧濃度，2小時處理，然后行光子照射X線和碳離子束流照射。照射后的RAT1細胞與正常腸上皮細胞IEC6共同培養(yǎng)行克隆存活實驗CLONOGENICFORMATIONASSAY，CFA。主要的觀察指標為①細胞接種的貼壁率PLATINGEFFICIENCY，PE，計算共培養(yǎng)PE與單獨培養(yǎng)PE的比值。②然后計算兩種細胞在各自單獨培養(yǎng)和共培養(yǎng)條件下的存活率，并計算兩者的比值。。結(jié)果RAT1細胞和IEC6細胞共同培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)正常細胞系IEC6其接種貼壁率PLATINGEFFICIENCY，PE上升，共培養(yǎng)PE與單獨培養(yǎng)PE比值1，在有氧環(huán)境中為10914，在慢性乏氧條件下為10881。在X線照射實驗中，無論是有氧還是乏氧條件下，共培養(yǎng)的IEC6細胞存活率均出現(xiàn)上升。有氧條件下共培養(yǎng)的存活率與單獨培養(yǎng)的存活率的比值在與接受OGY，2GY和6GY的劑量照射的RAT1共培養(yǎng)后，其存活率的比值分別為1，10482和10405；然而腫瘤細胞RAT1的存活率未見明顯提高，其比值均小于1或者約為1；在其后的碳離子照射實驗中，無論有氧還是慢性乏氧條件下，共培養(yǎng)的腫瘤細胞RAT1和正常腸上皮細胞IEC6的存活率均未見明顯提高，共同培養(yǎng)與單獨培養(yǎng)存活率的比值都約為1左右。結(jié)論共培養(yǎng)實驗結(jié)果顯示無論在有氧條件下還是乏氧環(huán)境中，受到X線照射的腫瘤細胞RAT1對正常腸上皮細胞IEC6長影響較大，促進IEC6細胞的存活率提高；與之不同，正常腸上皮細胞IEC6對腫瘤細胞RAT1的影響較小，RAT1細胞存活率沒有明顯上升。在重離子實驗中，無論腫瘤細胞RAT1還是正常的腸上皮細胞IEC6均未出現(xiàn)存活率的明顯提高，說明兩種細胞之間的影響較小。關鍵詞前列腺癌細胞；腸上皮細胞碳離子；共培養(yǎng)中圖分類號R7357

簡介：參考文獻?????????????????????????96結(jié)論?????????????????????????????????????．100綜述一MICRORNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中與NOTCH信號通路的關系??101綜述二MICRORNA和腫瘤?????????????????．116致謝?????????????????????????????????????．127個人簡歷??????????????????????????1284699～～一¨～～一¨¨¨論結(jié)討小

簡介：背景骨缺損是一類常見、多發(fā)且治療復雜的疾患因創(chuàng)傷、炎癥、腫瘤等后天因素及先天畸形等原因造成累及外顯和功能部位不僅給患者造成嚴重的形態(tài)畸形和功能障礙也成為困擾臨床醫(yī)師的一大難題。近年來隨著材料科學和生物學的發(fā)展組織工程學作為高新技術(shù)成為一門與多學科交叉的新興邊緣學科隨之應運而生并得到了迅速的發(fā)展利用組織工程學方法構(gòu)建組織工程骨已成為骨移植材料的研究熱點。目的殼聚糖CHITOSANCS材料與種子細胞具有較好的生物相容性是決定殼聚糖在骨組織工程中應用的關鍵因素。本實驗將轉(zhuǎn)染有成骨生物活性因子基因的細胞與殼聚糖膜材料共同培養(yǎng)通過細胞增殖、粘附實驗觀察轉(zhuǎn)染細胞與殼聚糖膜支架材料的生物相容性。方法1骨形成蛋白27真核表達載體的構(gòu)建11真核表達載體的構(gòu)建分別構(gòu)建BMP2PCDNA31、BMP7PCDNA31表達載體并經(jīng)測序、雙酶切、PCR鑒定。12將構(gòu)建的質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染MG63細胞通過RTPCR檢測HBMP2、HBMP7MRNA水平表達通過WESTERNBLOT、免疫細胞化學染色檢測HBMP2、HBMP7蛋白在細胞內(nèi)的表達。2轉(zhuǎn)染細胞在殼聚糖膜表面的增殖與分化情況的研究21MTS增殖檢測將材料及細胞置于96孔板中培養(yǎng)分正常MG63組MG63CS組轉(zhuǎn)染BMP2組轉(zhuǎn)染BMP2CS組轉(zhuǎn)染BMP7組轉(zhuǎn)染BMP7CS組在24H、48H、72H、96H時MTS法檢測細胞增殖情況。22掃描電鏡檢測將材料及細胞于24孔板中分為MP2PCDNA31轉(zhuǎn)染MG63CS組與BMP7PCDNA31轉(zhuǎn)染MG63CS組培養(yǎng)24H、72H、120H收集準備樣本掃描電鏡觀察細胞粘附情況。結(jié)果1真核表達載體的構(gòu)建經(jīng)測序、雙酶切、PCR鑒定結(jié)果表明成功構(gòu)建了BMP2PCDNA31、BMP7PCDNA31表達載體。2轉(zhuǎn)染及表達RTPCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染細胞中有目的基因的表達WESTERNBLOT及細胞免疫組化法均檢測到轉(zhuǎn)染細胞中有目的蛋白BMP2、BMP7的表達表明轉(zhuǎn)染后重組載體在MG63細胞中成功表達。3MTS增殖實驗轉(zhuǎn)染細胞在材料上培養(yǎng)24H、48H、72H時MTS檢測值的增長表明隨著時間的推移細胞在材料表面能生長增殖。但與正常MG63細胞組相比轉(zhuǎn)染組的增殖無明顯差異P＞005表明體外殼聚糖材料對載有轉(zhuǎn)染有目的基因的MG63細胞的增殖無明顯促進作用。4掃描電鏡觀察分為BMP2PCDNA31轉(zhuǎn)染MG63CS組與BMP7PCDNA31轉(zhuǎn)染MG63CS組于培養(yǎng)24H、72H、120H時的電鏡照片顯示分別轉(zhuǎn)染有BMP2、BMP7基因的MG63細胞在殼聚糖材料上正常粘附、生長、增殖。結(jié)論本研究成功構(gòu)建能在MG63中表達BMP2、BMP7的真核表達載體。殼聚糖材料的生物相容性可有利于轉(zhuǎn)染有目的基因的MG63細胞的粘附及增殖該材料有望成為骨缺損修復及重建的替代材料。

簡介：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院中國人民解放軍總醫(yī)院碩士學位論文可逆性永生化正常成人肝細胞RSSR69HL7702的構(gòu)建及其生物學特性的測定姓名姚文芳申請學位級別碩士專業(yè)老年醫(yī)學指導教師薛毅瓏20070531軍醫(yī)進修學院研究生學位論文原創(chuàng)性聲明秉承我院“敬業(yè)、勤奮、求實、創(chuàng)新”的學風，本人聲明所呈交的論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得我院或其他教育機構(gòu)的學位及證書而使用過的材料，對本文的研究作出貢獻的個人或集體，均已在文中做了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任。論文作糍名影嗍岬付指導剎磁各鼉訊雌期‘7。一。軍醫(yī)進修學院研究生學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人保證畢業(yè)離院后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為軍醫(yī)進修學院或解放軍總醫(yī)院。學院有權(quán)保留并向國家有關部門或機構(gòu)送交論文原件、復印件和電子版本，可以采用影印、縮印、掃描或其它手段保存論文以供被查閱和借閱。學院可以公布學位論文的全部或部論文作者簽名指導教師簽名翳

簡介：點擊查看更多人臍血基質(zhì)細胞生物學特點及其體外擴增的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第四軍醫(yī)大學碩士學位論文五倍子水提取物對體外培養(yǎng)人牙髓細胞生物學特性影響的實驗研究姓名盧婧申請學位級別碩士專業(yè)口腔內(nèi)科學（牙體）指導教師唐榮銀20070501第四軍醫(yī)大學碩士學位論文五倍子水提取物對體外培養(yǎng)人牙髓細胞生物學特性影響的實驗研究碩士研究生盧婧導師唐榮銀教授主任醫(yī)師第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院牙體科，西安710032中文摘要中文摘要牙髓疾病多繼發(fā)于齲病，是一個以細菌、細菌代謝產(chǎn)物及炎性因子等多因素參與的復雜過程。如何保護牙髓組織，促進牙髓細胞增殖、分化，發(fā)揮防御修復潛能是活髓保存治療中研究的重點。五倍子中的主要有效成分為鞣酸，具有抗菌、抗自由基、收斂、止血、止痛、減少滲出等多種功效。已有研究證實它能抑制膠原分解，促進牙本質(zhì)再礦化，抑制釉質(zhì)脫礦，用鞣酸間接蓋髓能促進修復性牙本質(zhì)的形成。但是尚未有文獻報道其對直接蓋髓治療的作用。本實驗旨在觀察五倍子水提取物對體外培養(yǎng)人牙髓細胞基本生物學特性的影響，初步探討其作為直接蓋髓材料的可能性。第一部分第一部分人牙髓細胞原代培養(yǎng)方法的比較人牙髓細胞原代培養(yǎng)方法的比較本實驗分別采用組織塊法、酶消化法及組織塊酶消化法進行人牙髓細胞原代培養(yǎng)。結(jié)果顯示組織塊酶消化法中組織塊解離、貼附和細胞游出狀況均優(yōu)于單純組織塊法和單純酶消化法，成功率較高。提示采用組織塊酶消化法可提高人牙髓細胞原代培養(yǎng)的成功率。2

簡介：研究背景及目的肌腱病在運動醫(yī)學領域比較常見，普遍認為各種不恰當運動致肌腱過度重復使用，肌腱出現(xiàn)微小的撕裂損傷，造成肌腱組織逐漸變性和退變，但其發(fā)病機制目前尚不十分清楚。相關研究發(fā)現(xiàn)人肌腱細胞在體外牽伸載荷條件下產(chǎn)生的前列腺素E2PROSTAGLINE2，PGE2明顯增高，過度運動鍛煉后肌腱腱鞘周圍PGE2水平也明顯增加，提示過度的機械載荷下肌腱細胞和其周圍結(jié)締組織產(chǎn)生的PGE2有可能在肌腱病發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。正常肌腱組織富含膠原蛋白，主要是Ⅰ型膠原，以及少量的Ⅲ型膠原，肌腱病組織主要是膠原基質(zhì)發(fā)生了改變，膠原纖維束連續(xù)性中斷，結(jié)構(gòu)松散、裂隙。退行性病變肌腱及負荷大的肌腱止點處Ⅲ型膠原增多，肌腱病的動物模型的在體研究發(fā)現(xiàn)肌腱的膠原總量有顯著降低，Ⅲ型膠原增高，在體外培養(yǎng)條件下肌腱細胞隨傳代次數(shù)的增加，肌腱增殖能力有較大降低，Ⅰ型膠原分泌減少，ⅠⅢ型膠原比例倒置。在各種造成肌腱損傷因素下，肌腱膠原基質(zhì)發(fā)生重塑，膠原類型發(fā)生轉(zhuǎn)變，并逐漸積累基質(zhì)惡化。PGE2是否能導致肌腱細胞、胞外膠原基質(zhì)和生物力學的改變尚缺乏直接證據(jù)。為此，我們從肌腱病組織臨床病理學研究著手，觀察肌腱病組織病理學特征，分析外源性PGE2對肌腱細胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白分泌的影響，探明對肌腱組織中膠原類型、膠原含量及生物力學等影響，初步探討PGE2與肌腱病之間的關系。方法1人肌腱病組織的組織病理學觀察臨床收集肌腱病手術(shù)治療中切除的病變肌腱組織和因外傷、截肢等手術(shù)中廢棄的正常肌腱組織，HE染色比較觀察肌腱細胞結(jié)構(gòu)、肌腱基質(zhì)形態(tài)，苦味酸天狼星紅染色在偏光顯微鏡下比較觀察肌腱膠原基質(zhì)變化，分析膠原含量和膠原類型的變化。2不同劑量外源性PGE2對體外人肌腱細胞增殖及胞外基質(zhì)膠原的影響使用組織塊法和酶消化法分離人肌腱原代細胞，進行培養(yǎng)與傳代，鏡下觀察細胞形態(tài)，Ⅰ、Ⅲ型膠原免疫熒光染色法鑒定肌腱細胞；將肌腱細胞按1104數(shù)量級接種96孔培養(yǎng)皿中，分別加入不同劑量PGE2共培養(yǎng)12H、24H、48H，應用3HTDR摻入法通過閃爍計數(shù)測量肌腱細胞的增殖情況；應用Ⅰ、Ⅲ型膠原酶聯(lián)免疫檢測不同劑量PGE2作用肌腱細胞后培養(yǎng)液中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白分泌量。3外源性的PGE2對兔跟腱膠原含量、比例及生物力學特性的影響將健康日本短耳兔根據(jù)PGE2注射劑量的不同隨機分兩組，即50NG組和500NG組，每組動物隨機選擇一側(cè)后肢跟腱作為實驗側(cè)，對應的另一側(cè)為對照側(cè)，實驗側(cè)跟腱注射PGE2，對照側(cè)跟腱注射等量生理鹽水，注射方式為經(jīng)皮注射，注射部位為跟腱中部，注射量為02ML，每周注射一次，4周和8周后分別處死兩組實驗動物，收獲兔跟腱標本，觀察大體情況，取標本進行固定包埋切片HE染色，鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)、基質(zhì)形態(tài)，天狼星紅染色在偏光顯微鏡下觀察組織中膠原成分的變化并應用圖像分析軟件定量分析Ⅰ、Ⅲ型膠原含量，制備電鏡標本在透射電鏡下觀測膠原纖維的密度和纖維直徑的變化。另取注射8周后標本，應用微機控制電子萬能測試機對跟腱進行力學測試，比較實驗側(cè)和對照側(cè)跟腱的最大載荷、抗拉強度的變化，比較高、低劑量兩組實驗側(cè)跟腱的最大載荷、抗拉強度的變化。結(jié)果1與正常肌腱組織比較，肌腱病組織HE染色顯示肌腱組織膠原纖維排列紊亂，結(jié)構(gòu)明顯破壞，天狼星紅組織染色示肌腱組織中黃紅色的Ⅰ型膠原纖維明顯減少，綠黑色的Ⅲ型膠原纖維明顯增多，整個膠原基質(zhì)排列雜亂無章，失去正常肌腱組織結(jié)構(gòu)。2兩種方法均能分離培養(yǎng)出人原代肌腱細胞，且傳代培養(yǎng)生長良好。加入PGE2培養(yǎng)48H時，小劑量的PGE2能促進細胞增殖P005；隨著PGE2劑量增大，能抑制肌腱細胞增殖P005，Ⅲ型膠原分泌增加明顯P3PGE2注射實驗側(cè)跟腱出現(xiàn)同人肌腱病組織類似的表現(xiàn)，即不同程度表面血管化，與腱鞘粘連，彈性差，局部呈灰黃色。與對照側(cè)比較，HE染色顯示兩組實驗側(cè)跟腱組織中膠原纖維的結(jié)構(gòu)均破壞，凌亂、松弛、欠規(guī)整、纖維斷裂；天狼星紅苦味酸染色顯示實驗側(cè)Ⅲ型膠原纖維大量增加，排列紊亂，Ⅰ型膠原明顯減少，膠原纖維明顯變細，定量分析顯示實驗側(cè)肌腱內(nèi)Ⅰ型膠原含量明顯低于對照側(cè)P005。電鏡下觀察，實驗側(cè)肌腱單位面積內(nèi)膠原纖維密度降低，直徑粗大的纖維比例降低，直徑細小的纖維比例增加P結(jié)論1肌腱病組織病理學觀察發(fā)現(xiàn)人肌腱膠原基質(zhì)發(fā)生了明顯變化，膠原基質(zhì)退變、變性，纖維結(jié)構(gòu)破壞；膠原的類型發(fā)生變化，即Ⅰ型膠原減少，Ⅲ型膠原增多；2外源性PGE2作用條件下影響人肌腱細胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型膠原的分泌情況，小劑量能促進細胞增殖或影響不明顯，隨著PGE2劑量增大能抑制細胞增殖；不同劑量PGE2均能使肌腱細胞分泌Ⅲ型膠原蛋白增多，使ⅢⅠ型膠原比例倒置。3重復暴露PGE2能導致肌腱膠原基質(zhì)改變，局部組織裂解，纖維松散，Ⅰ型膠原降低，Ⅲ型膠原增加，單位面積內(nèi)膠原纖維密度降低，直徑變細，生物力學性能降低，和肌腱病組織病理學特征一致。

簡介：研究目的探討密度分離臍血造血干祖細胞體外擴增和體內(nèi)重建造血的潛能；胎兒骨髓間質(zhì)干細胞對CD34細胞體外擴增的造血支持作用；體外誘導臍血造血干祖細胞向B細胞分化發(fā)育的規(guī)律。研究內(nèi)容1利用造血干祖細胞培養(yǎng)、體外擴增、移植動物模型等技術(shù)，研究不同比密FICOLL泛影葡胺分離液分離臍血造血干祖細胞的造血活性。2體外分離、純化胎兒骨髓間質(zhì)干細胞MINIMACS免疫磁珠分離臍血CD34細胞；建立胎兒骨髓間質(zhì)干細胞、細胞因子與CD34細胞共培養(yǎng)體系，用液體培養(yǎng)方法擴增細胞；實時定量RTPCR技術(shù)分析培養(yǎng)細胞的NUCLEOSTEMIN基因表達。3體外免疫磁珠分離純化臍血造血干祖細胞；在小鼠S17基質(zhì)細胞支持下，臍血造血干祖細胞、T3、IL7共培養(yǎng)建立體外B細胞分化發(fā)育培養(yǎng)體系，誘導臍血造血干祖細胞B細胞分化；用流式細胞儀、PCR、RTPCR技術(shù)檢測不同培養(yǎng)時間分化的B細胞。研究方法1密度分離臍血細胞配制不同密度FICOLL泛影葡胺細胞分離液，分別應用密度為1054GML、1064GML、1072GML、1077GML、1084GMLFICOLL泛影葡胺不連續(xù)密度梯度離心分離臍血有核細胞成分。2造血祖細胞集落培養(yǎng)五種不同比密FICLL泛影葡胺分離液分離的臍血細胞，在甲基纖維素體系中培養(yǎng)測定其集落形成能力。CFUGM體系含有細胞2105ML，20％FBS，20NGMLGMCSF，09％甲基纖維素。BFUE體系含有細胞2105ML，105M2巰基乙醇，3MML谷氨酰胺，馬血清25％，白細胞條件培養(yǎng)液20％，EPO2UML，09％甲基纖維素。充分混勻以每孔025ML加入24孔培養(yǎng)板中，重復2孔，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，CFUGM培養(yǎng)7天，BFUE培養(yǎng)14天，倒置顯微鏡下觀察計數(shù)CFUGM，BFUE。鑒別標準CFUGM每個集落至少含有40個細胞；BFUE集落呈多中心狀，橘紅色，至少含有100個細胞。3密度分離細胞的生物學特性分析BALBC照射小鼠體內(nèi)輸注不同比密FICOLL泛影葡胺分離液分離的臍血細胞，觀察其造血潛能。FICOLL泛影葡胺分離液分離的細胞，用無菌生理鹽水洗滌二次后，計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為2106ML，小鼠經(jīng)致死劑量85GY照射后隨機分為3組，照射后2小時完成輸注。Ⅰ組6只，輸注無菌生理鹽水02ML；Ⅱ組6只，輸注經(jīng)1077GMLFICOLL泛影葡胺分離液分離洗滌后的臍血MNC1077細胞02ML；Ⅲ組6只，輸注經(jīng)1064GMLFICOLL泛影葡胺分離液分離洗滌后的臍血MNC1064細胞02ML。所有小鼠均采用尾靜脈輸注。4臍血造血干祖細胞體外擴增取經(jīng)鑒定的MSCS接種于24孔板中，當細胞生長達80％匯合度時，接種MINIMACS分選的CD34細胞4000孔，總體積為1ML，共分4組每組3孔①CD34細胞組；②胎兒骨髓MSCSCD34細胞組；③細胞因子CD34細胞組，細胞因子濃度為50NGMLSCF、50NGMLIL3、50NGMLFL、50NGMLTPO；④胎兒骨髓MSCS細胞因子CD34細胞組。培養(yǎng)體系為含10％FBS的DMEM，置5％CO2、飽和濕度37℃培養(yǎng)。每7天半量換液1次并補充新的細胞因子，濃度同前。5臍血造血干祖細胞B細胞分化培養(yǎng)接種DYNALBEADS分選的CD34CD19細胞或細胞儀分選的CD34CD19CD38細胞于預鋪S17基質(zhì)細胞的96孔培養(yǎng)板中。培養(yǎng)體系為ΑMEM培養(yǎng)液，含3％FBS，50ΜM2巰基乙醇，1％L谷氨酰胺、T3及細胞因子組合，每孔總體積100ΜL。置5％CO2，飽和濕度，37℃培養(yǎng)。每7天半量換液1次并補充新的細胞因子，濃度同前。6流式細胞分析術(shù)分選或培養(yǎng)的1106細胞標記前用含1％牛血清白蛋白HAS的PBS洗滌1次，用熒光標記小鼠抗人單克隆抗體標記，置4℃條件下30MIN，用含1％HAS的PBS洗滌1次，加04M1含01％疊氮鈉的PBS，流式細胞儀檢測。分析軟件為CELLQUEST。7CD34細胞NUCLEOSTEMI力基因表達的分析定量PCR反應用于NUCLEOSTEMIN基因分析。反應體系為25ΜL，包括1ΜLCDNA模板和24ΜL反應混合液其中含25MMMGCL2，20PMOL引物，01ΜLSYBERGREENⅠ11000。PCR循環(huán)參數(shù)為95℃預變性2MIN，94℃30S，58℃30S，72℃30S，40個循環(huán)。以GAPDH內(nèi)參照，擴增長度為205BP，GAPDH基因連于PMD18T載體定量稀釋，作為標準曲線的模板。每個DNA樣品做2個平行管，重復3次實驗，反應結(jié)束后使用定量PCR儀的分析軟件對實驗結(jié)果進行分析，計算各樣本基因的原始拷貝數(shù)，單位為拷貝ΜLCDNA。NUCLEOSTEMINPCR擴增產(chǎn)物與相應GAPDH的擴增產(chǎn)物原始拷貝數(shù)的比值能反映轉(zhuǎn)錄水平的差異。此外，采取上述方法PCR或RTPCR分析T3RΑ1、T3RΑ2、HT3RΒ1、IΜ、CΜ、IGLL、DQ52D727、DXP1D39、DQ52DXP1等基因的表達、重組情況。研究結(jié)果11064GMLFICOLL泛影葡胺分離液分離臍血細胞中，CFUGM集落數(shù)為373±2891105MNC，BFUE為121±701105MNC；在細胞因子刺激下，1064GMLFICOLL泛影葡胺分離液分離臍血MNC在體外擴增14天時CFUGM的擴增倍數(shù)達522倍；1064GMLFICOLL泛影葡胺分離液分離的造血干祖細胞可在85GY致死劑量照射小鼠體內(nèi)植入，輸注1064GMLFICOLL分離臍血MNC產(chǎn)生的脾結(jié)節(jié)數(shù)是輸注1077GMLFICOLL泛影葡胺分離液分離臍血MNC的22倍。2胎兒骨髓間質(zhì)干細胞表達CD29、CD44；免疫磁珠分選CD34細胞的平均純度為974％；胎兒骨髓間質(zhì)干細胞CD34細胞共培養(yǎng)28天，CD34細胞仍占有核細胞的643％；CD34細胞在胎兒骨髓間質(zhì)干細胞、細胞因子作用下培養(yǎng)28天，有核細胞總數(shù)、CD34細胞數(shù)分別被擴增165105倍、788倍。3T3誘導臍血造血干祖細胞B細胞分化，在我們選用的實驗條件下，T3、IL7與小鼠S17基質(zhì)細胞共培養(yǎng)是誘導CD34CD19造血干祖細胞向B細胞分化的最佳條件，誘導的CD19B部分細胞表達CD21，還表達CD10、CD20、CD24抗原，弱表達CD23抗原、HSL11、HSL96，不表達CD3、CD33、CD34、IGM抗原，B細胞向成熟方向發(fā)育；在小鼠S17基質(zhì)細胞支持下，單純T3誘導的CD19B細胞大多數(shù)體積較小，CD19B細胞幾乎不表達CD21，B細胞發(fā)育停留在較原始階段；34CD19CD38造血干祖細胞B細胞分化的擴增倍數(shù)明顯高于34CD19造血干祖細胞，持續(xù)擴增的時間也延長；新鮮臍血與凍存臍血CD34CD19造血干祖細胞B細胞分化的純度、擴增倍數(shù)無明顯差異；小鼠S17基質(zhì)細胞高表達T3RΑ1，傳代20代以上小鼠S17基質(zhì)細胞，失去支持臍血CD34CD19造血干祖細胞B細胞分化的能力。4純化的臍血CD34CD19造血干祖細胞檢測到胚系DQ52基因，未發(fā)生DHJH基因重排；誘導分化的B細胞優(yōu)先選擇DQ52JH4、DQ52JH3、DQ52JH5基因重排，未檢測到DQ52JH、DQ52JH2、DQ52JH6基因重排；在整個B細胞分化發(fā)育過程中，我們檢測到持續(xù)的IΜ、CΜ、IGLL轉(zhuǎn)錄。研究結(jié)論11064GMLFICOLL泛影葡胺分離的造血干祖細胞在體外具有較高的增殖、持續(xù)造血的能力及較強的體內(nèi)造血重建潛能。2胎兒骨髓間質(zhì)干細胞可有效擴增臍血造血干祖細胞。3T3、IL7與小鼠S17基質(zhì)細胞體外能誘導臍血造血干祖細胞B細胞分化，免疫球蛋白重鏈基因優(yōu)勢選擇DHJH4、DHJH3、DHJH5重排。臍血凍存三年對造血干祖細胞活性、B細胞分化能力無影響。

簡介：分類號密級國際十進分類號（UDC）第四軍醫(yī)大學學位論文學位論文人涎腺粘液表皮樣癌耐藥細胞人涎腺粘液表皮樣癌耐藥細胞MC35FU的建立及其生物學特性的建立及其生物學特性（題名和副題名）繆葉（作者姓名）指導教師姓名吳軍正教授指導教師單位第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院口腔生物學教研室申請學位級別碩士專業(yè)名稱口腔基礎醫(yī)學生物學論文提交日期200905答辯日期200905論文起止時間2007年8月至2009年4月學位授予單位第四軍醫(yī)大學人涎腺粘液表皮樣癌耐藥細胞系人涎腺粘液表皮樣癌耐藥細胞系MC35FU的建立及其生物學特性的建立及其生物學特性ESTBLISHNENTOFAMUTIDRUGRESISTANCECELLLINEMC35FUOFHUMANSALIVARYMUCOEPIDERMOIDCARCINOMAIT’SBIOLOGICALECTERISTICS研究生生繆葉學科專業(yè)學科專業(yè)口腔基礎醫(yī)學（口腔生物學）所在單位所在單位第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院口腔生物學教研室指導教師指導教師吳軍正教授輔導教師輔導教師劉峰副教授資助基金項目資助基金項目國家自然科學基金資助項目，編號30672343關鍵詞關鍵詞多藥耐藥涎腺粘液表皮樣癌五氟尿嘧啶中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學2009年04月

簡介：本文利用逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染技術(shù)，將重組的糖皮質(zhì)激素受體ΒGRΒ正義和反義基因轉(zhuǎn)入大鼠腎小球系膜細胞，G418篩選陽性克隆，利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應RTPCR和基因測序，驗證插入HGRΒ基因的正確性，采用WESTEMBLOT檢測細胞內(nèi)GRΒ蛋白表達水平；通過流式細胞術(shù)和MTT比色法檢測脂多糖LPS誘導下的GRΒ不同表達水平的腎小球系膜細胞增殖狀態(tài)、以及其對地塞米松抑制細胞增殖的反應性，研究GRΒ在糖皮質(zhì)激素效應產(chǎn)生中的作用。研究結(jié)論如下成功構(gòu)建了穩(wěn)定高表達和低表達GRΒ的腎小球系膜細胞株；腎小球系膜細胞內(nèi)GRΒ表達水平高低是決定糖皮質(zhì)激素效應敏感抑或抵抗的重要因素。

簡介：蘇州大學碩士學位論文人OX40L轉(zhuǎn)基因細胞的構(gòu)建與單克隆抗體的研制及其生物學功能的研究姓名王勤申請學位級別碩士專業(yè)免疫學指導教師張學光20040501叁嬰些莖蘭里塑墮竺墊壁蘭苧塞墮墮竺塑竺墨苧皇塑堂墊墼竺翌壅一IL將反應T細胞用抗人CD3激發(fā)型單抗或聯(lián)合CD3和抗CD28單抗激發(fā)2D后，加入刺激細胞L929／OX40L或L929／MOCK，共培養(yǎng)3D3HTDR摻入法顯示，L929／OX40L細胞能有效地促進T細胞增殖，而聯(lián)合抗CD28單抗，促增殖效應則更為顯著。細胞表型分析L929／OX40L能促進CD4T細胞活化。同樣，細胞周期及凋亡檢測表明，該轉(zhuǎn)基因細胞能促進T細胞增殖抗凋亡。ELISA法檢測培養(yǎng)上清細胞因子表明，L929／OX40L能明顯促進T細胞對M2、IL10和IFNY的分泌。3分泌鼠抗人OX40L革抗的雜交瘤細胞株的制備利用上述構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因細胞L929，OX40L為免疫原，免疫BAL，B／C小鼠，采用B淋巴細胞融合技術(shù)，將反復免疫后的小鼠的脾臟細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2／0進行細胞融合，以此轉(zhuǎn)基因細胞作為陽性篩選細胞，以轉(zhuǎn)空質(zhì)粒的對照細胞L929／MOCK作為陰性對照細胞，經(jīng)免疫熒光標記分析及抗體分泌陽性孔內(nèi)雜交瘤細胞的反復篩選，并經(jīng)多次克隆化培養(yǎng)，最終獲得6株持續(xù)、穩(wěn)定分泌鼠抗人OX40L單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為9H10、4C12、LET、8D10、4H4和1GI。經(jīng)快速定性試紙法分析鑒定，9H10、1E7、4H4和1G1的重鏈均為IGGL4C12的重鏈為IGG2B8D10為IGG2A，而輕鏈均為K。經(jīng)體外連續(xù)傳代40代培養(yǎng)，液氮凍存半年后復蘇，仍生長良好，穩(wěn)定分泌抗體。繼而采用本室建立的腹水誘生和純化方案，腹水形成陽性率為95％以上，腹水的產(chǎn)量平均約為5OML／只小鼠。經(jīng)PROTEING親和層析柱分離純化，腹水型單抗純化后蛋白含量在O8～10MG／ML之間。純化后單抗的效價為11000以上，抗體蛋白用于間接免疫熒光分析的用量為022“E／1X106細胞。4鼠抗人OX40L單克隆抗體的體外生物學特性研究以L929／OX40L為競爭靶細胞，經(jīng)間接免疫熒光標記的競爭抑制試驗，結(jié)果顯示，8D10與9H10識別OX40L分子的抗原位點完全相同，4C12與4H4也能識別另一相同的OX40L分子的抗原位點，而1E7和1G1則識別其他不同的抗原位點。另外，經(jīng)間接免疫熒光標記顯示，9H0、4C12和IE7能特異性識別活化的B細胞及成熟DC所表達的OX40L分子。生物學功能的研究結(jié)果表明，5株單抗均能抑制單向和雙向混合淋巴細胞反應，而另一株單抗1E7作用則相反，它能聯(lián)合激發(fā)型CD3單抗促進T細胞增殖。提示這II

簡介：隸南『大璺碩士學位論文體外實驗中PI103對卵巢癌細胞生物學特性和脂肪酸合酶表達的影響研究生姓名昱迪東南大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得東南大學或其它教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我～同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。東南大學學位論文使用授權(quán)聲明東南大學、中國科學技術(shù)信息研究所、國家圖書館有權(quán)保留本人所送交學位論文的復印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。除在保密期內(nèi)的保密論文外，允許論文被查閱和借閱，可以公布包括刊登論文的全部或部分內(nèi)容。論文的公布包括刊登授權(quán)東南大學研究生院辦理。研究生簽名島師簽名日期少，篡∥，尹。

簡介：目的檢測MIR1826在大腸癌患者中的表達情況并分析其在對臨床相關性。同時通過MIRNAINHIBIT轉(zhuǎn)染干擾大腸癌SW480細胞中MIR1826的表達觀察其對大腸癌細胞增殖、周期、凋亡及侵襲遷移的影響探討MIR1826在大腸癌中的生物學作用進一步分析其潛在靶基因為大腸癌的靶向基因治療奠定基礎。方法1、收集大腸癌患者標本72例同時收取癌組織及相應的癌旁組織。通過SYBRGREEN熒光定量PCRQRTPCR檢測各組織中MIR1826的表達水平。培養(yǎng)五株大腸癌細胞株采用QRTPCR方法篩選出MIR1826高表達細胞株SW480備后續(xù)實驗使用。2、通過生存分析探究MIR1826在大腸癌中表達跟患者預后的關系并分析MIR1826表達水平跟臨床病理參數(shù)的相關性在通過單因素及COX多因素分析討論MIR1826在大腸癌中預后影響的獨立性。3、以脂質(zhì)體LIPOFECTAMIM2000為載體將帶熒光標記的MIRNAINHIBIT轉(zhuǎn)染SW480細胞并用流式細胞儀檢測從而篩選出最佳轉(zhuǎn)染條件。設計制備針對MIR1826的3組不同INHIBIT序列以最佳轉(zhuǎn)染條件轉(zhuǎn)染細胞后采用QRTPCR驗證干擾效果并進而篩選出最佳干擾片段以備后續(xù)實驗用。4、將先前篩選出的最佳干擾片段MIR1826INHIBIT按最佳轉(zhuǎn)染條件對MIR1826高表達細胞株SW480進行轉(zhuǎn)染干擾再分別采用四甲基偶氮唑藍MTT法流式細胞術(shù)FCM侵襲實驗遷移實驗檢測INHIBIT干擾MIR1826后對大腸癌SW480細胞增殖凋亡、周期及侵襲、遷移性的影響。結(jié)果1癌旁組織中MIR1826的表達水平明顯低于腫瘤組織P結(jié)論MIR1826在大腸癌中高表達且跟大腸癌患者生存時間負相關并為大腸癌中一項獨立的預后影響因素。轉(zhuǎn)染MIRNAINHIBIT能使MIR1826表達明顯干擾下調(diào)進而抑制大腸癌細胞株SW480增殖并加速其凋亡其周期大部分阻滯于G0G1期同時其細胞的侵襲和遷移性減低。提示MIR1826可能在大腸癌發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色過表達的MIR1826或成為一種新的大腸癌預后標志物并有可能為靶向治療大腸癌提供一個新的策略。

簡介：NK細胞可直接殺傷某些腫瘤和病毒感染細胞，在固有免疫應答中起著關鍵的作用。樹突狀細胞DC是激活初始T細胞、啟動特異性免疫應答的重要抗原遞呈細胞。最近發(fā)現(xiàn)一類能夠分泌IFNΓ并具有殺傷功能的新型樹突狀細胞亞群IKDC，該亞群細胞既具有NK細胞的表面標記，又具有常規(guī)DC的表面標記，即CD3CD19CD11CINTB220NK11CD49BGR1。與NK細胞類似，IKDC表達活化性受體NKG2D介導對靶細胞的殺傷作用在腫瘤細胞的訓化下，IKDC表面MHCⅡ類分子和共刺激分子的表達增強，并能交叉提呈腫瘤抗原給T細胞，從而啟動抗腫瘤的適應性免疫應答。因此，在腫瘤的免疫治療中具有良好的應用前景。但是，IKDC在小鼠體內(nèi)的含量極少，只占脾臟CD11C細胞的12％（約50000個）和骨髓CD11C細胞的2％，用直接分選法獲得的IKDC數(shù)量遠遠不能滿足過繼免疫治療所需的細胞數(shù)。本研究試圖構(gòu)建共表達小鼠RAE1Ε（NKG2D的配體）和膜表達型IL15的轉(zhuǎn)基因細胞株，利用該轉(zhuǎn)基因細胞株給IKDC提供雙重活化信號，從而達到體外刺激IKDC增殖和活化的目的。第一部分BAF3MB15RAE轉(zhuǎn)基因細胞株的制備利用重疊PCR技術(shù)將小鼠CD8Α基因的信號肽序列、小鼠IL15成熟肽編碼基因以及CD8Α跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)的編碼基因拼接起來，獲得膜表達型的IL15編碼基因命名為MB15。以PMXPIE為模板，利用PCR技術(shù)擴增小鼠RAE1Ε基因。將RAE1Ε基因和MB15基因分別插入真核表達載體PVITRO2MCS的兩個多克隆位點中，成功構(gòu)建重組真核表達載體PVMB15RAE1Ε。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將PVMB15RAE1Ε轉(zhuǎn)染至BAF3細胞，通過潮霉素以及FACS分選后單克隆篩選的方法，獲得穩(wěn)定共表達膜型IL15和RAE1Ε蛋白的BAF3細胞株，命名為BAF3MB15RAE。用類似的方法獲得只表達膜型IL15或RAE1Ε的BAF3細胞株，分別命名為BAF3MB15和BAF3RAE。第二部分體外分析BAF3MB15RAE對IKDC生物學活性的影響用重組的小鼠GMCSF和IL4體外誘導小鼠骨髓細胞，得到成熟DC，將DC與絲裂霉素誘導凋亡的BAF3MB15RAE細胞株共培養(yǎng)7天后，檢測DC中IKDC的比例，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)BAF3MB15RAE細胞株刺激后，IKDC的比例出現(xiàn)明顯增高。此外，利用流式分選DC中的IKDCCD11CINTB220NK11，將IKDC和絲裂霉素誘導凋亡的BAF3工程細胞株按1∶1的比例共培養(yǎng)后，流式檢測IKDC表面CD40、CD80、CD86、MHCⅡ、NKG2D、FASL和TRAIL等膜表面分子的表達以及IFNΓ，的分泌情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)BAF3RAE1ΕMIL15細胞株刺激后，IKDC表面CD40、CD80、MHCⅡ、NKG2D和FASL均出現(xiàn)不同程度的增加，尤以MHCⅡ類分子的增加最為明顯?？傊狙芯砍晒?gòu)建了穩(wěn)定共表達膜型IL15和RAE1Ε的BAF3細胞株，該轉(zhuǎn)基因細胞株能提高DC中IKDC的比例，并促進IKDC表面CD40、MHCⅡ類分子和FASL等的表達，提示該轉(zhuǎn)基因細胞株很可能具有增強IKDC提呈腫瘤抗原以及殺傷腫瘤細胞的能力，為其在抗腫瘤方面的應用提供了實驗依據(jù)。

簡介：中山大學碩士學位論文人表皮干細胞及眼瞼鱗癌腫瘤干細胞生物學特性的研究姓名蔡裕申請學位級別碩士專業(yè)眼科學指導教師顏建華20070424中山大學碩士學位論文人表皮干細胞及眼瞼鱗癌腫瘤千細胞生物學特性的研究從8W一38W不等。眼瞼鱗狀細胞癌取自2005年7月～2006年6月期間在中山眼科中心四區(qū)接受手術(shù)的患者，病理診斷由本中心病理室作出。SUNEL鱗狀細胞癌細胞系由中山大學腫瘤防治中心友情提供。1取不同胚齡胚胎全身不同部位皮膚標本，作形態(tài)學觀察和免疫組織化學鑒定。取不同胚齡人皮膚標本，用10％福爾馬林溶液固定，石蠟包埋、切片，每片5PM，HE染色及免疫組化染色。第一抗體有P63，K19，CKAEL／AE3；以PBS替代一抗為陰性對照；2取新鮮胚胎皮膚組織進行表皮細胞體外培養(yǎng)及免疫組化鑒定新鮮胚胎皮膚組織經(jīng)含雙抗的PBS液沖洗后，采用組織塊培養(yǎng)法進行人胚胎表皮細胞原代培養(yǎng)，并作原代細胞的免疫組化鑒定。3人眼瞼皮膚鱗狀細胞癌形態(tài)學觀察及免疫組化鑒定取人眼瞼皮膚鱗狀細胞癌標本，用10％福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，切片，每片51UN，HE染色及免疫組化染色第一抗體為P63。4人眼瞼皮膚鱗狀細胞癌體外培養(yǎng)及免疫組化鑒定取新鮮人眼瞼皮膚鱗狀細胞癌組織，經(jīng)含雙抗的PBS液沖洗后，采用組織塊培養(yǎng)法進行癌細胞體外培養(yǎng)，并作原代細胞的免疫組化鑒定。5SUNEI鱗狀細胞癌細胞系體外細胞克隆實驗SU】、IEL鱗狀細胞癌細胞系由中山大學腫瘤防治中心提供。復蘇SUNEL細胞，按20個／ML，50個／ML，100個／ML的細胞濃度，在10MM矗徑細胞培養(yǎng)皿中進行細胞克隆。14天后細胞進行臺盼蘭染色，記數(shù)克隆率。觀察形成的克隆大小，并對克隆分類。6SUNEL鱗狀細胞癌細胞系亞細胞群比率流式檢測復蘇SUNEI細胞。按5106細胞濃度，依次用1％多聚甲醛固定細胞，破膜劑破膜，PE標記的P63抗體對細胞進行熒光染色。流式細胞儀檢測陽性細胞比率。7半定量RTPCR法檢測文『I屺1細胞中表皮發(fā)育基因表達提取SUNEI細胞總RNA，RTPCR法檢測總RNA中表皮發(fā)育基因P63，PCNA，K1，口1INTEGRIN，K15的表達情況；BAMIN作內(nèi)參。IL