簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學博士學位論文體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜細胞生物學行為及對不同藥物反應性的研究姓名李華軍申請學位級別博士專業(yè)婦產(chǎn)科學指導教師郎景和20040501里墜塑絲型查蘭墾主嬰莖些蘭蘭塑壁I_一MTIMPMGMLMMMRNANG0DICAMPPBSPCRPEGRAFSRFWRNAE州ASENNRPMGCRRPCRAPOPPROLJTEST11RISEUEDUUGUJMMPOMVEGFMOLPERLITERTISSUEINHIBITOROFMETALLOPROTEINASEMILLIGRAMMILLILITERMILLMOLPERLITERMESSENGERRNANANOGRAM0PTICALDENSITY0VARIANCHOCOLATECYSTPROGESTERONEPHOSPHATEBUFIEREDSALINEPOLYMERASECHAINREACTIONPOLYETHYLENEGLYCOLREVISEDAMERICANFERTILITYSOCIETYRNASEFREEWATERRIBONEUELEICACIDRIBONUELEASE’NNDIMETHYLFORMAMIDEROTATIONPERMINUTEGROWTHCURVEREVERSETRANSCRIPTATIONPOLYMERASECHAINREACTIONAPOPTOSISPROLIFERATION1’RIS，EDTABUFFERSOURCETHERAPEUTICSTRISHYDROXYMETHYLAMIMOMETHANEEUTOPIEENDOMETRIUMUNITMICROGRAMMICROLITERMATRIXMETALLOPROTEINASEMICROMOLPERLITERVASCULARENDOTHELIALGROWTH2摩爾每升基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑毫克毫升毫摩爾每升信使核糖核酸納克光密度細胞間粘附分子孕酮磷酸緩沖鹽液聚合酶鏈反應聚乙二醇美國生育學會無核酸酶的水核糖核酸核酸酶NN二甲基甲酰胺每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)生長曲線逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應凋亡增殖TRIS／EDTA緩沖液源頭治療論三羥甲基氨基甲烷在位內(nèi)膜決定論酶單位微克微升基質(zhì)金屬蛋白酶微摩爾每升血管內(nèi)皮生長因子

簡介：目的體外分離培養(yǎng)人羊水間充質(zhì)干細胞HAFMSCS，HUMANAMNIOTICFLUIDMESENCHYMALSTEMCELLS，觀察其生物學特性。低溫凍存HAFMSCS三個月，觀察凍存后細胞的生物學特性，找出最佳的凍存方案。體外誘導HAFMSCS向內(nèi)皮細胞分化，分別在常氧及低氧環(huán)境下觀察其分化為內(nèi)皮細胞的能力。方法采用四種方法分離培養(yǎng)HAFMSCS，用MTT法觀察各組細胞的增殖能力。流式細胞技術FACS檢測各組細胞表面抗原CD29，CD34，CD44，CD45，CD73，CD90，HLAABC，HLADR等的表達。比較各組細胞成脂、成骨的分化能力，及檢測各組細胞中OCT4，NANOG等MRNA表達水平。用不同成分的凍存液凍存HAFMSCS，凍存三個月后復蘇細胞，并分析其存活率、生物學特性及分化能力。體外采用VEGF和BFGF聯(lián)合誘導HAFMSCS向內(nèi)皮細胞分化，F(xiàn)ACS分析細胞VWF、CD31及CD133MRNA的表達水平，采用細胞免疫熒光的方法鑒定誘導分化后細胞VWF的表達情況，觀察誘導后細胞在MATRIGEL上形成毛細血管樣結構的能力。比較低氧環(huán)境與常氧環(huán)境下上述指標的差異。結果四種不同的培養(yǎng)方法均培養(yǎng)出HAFMSCS。其中CHANG培養(yǎng)基兩步培養(yǎng)法培養(yǎng)的細胞，其貼壁時間、細胞集落形成時間及細胞傳代時間較其余三組更短，培養(yǎng)15天即有細胞貼壁，45天可見細胞集落形成，細胞增殖快。四組細胞均表達間充質(zhì)干細胞標記物CD29、CD44、CD73、CD90，而不表達造血干細胞標記物CD34、CD45，符合間充質(zhì)干細胞的特征，各組之間無明顯差異。四組細胞成骨、成脂誘導成功，并分別通過油紅。染色及VONKOSSA染色證實。四組細胞中均檢測到OCT4，NANOGMRNA的表達。凍存三個月后的HAFMSCS，以凍存液方案為DMEMFBSDMSO541的細胞存活率最高，細胞增殖能力最強。而復蘇后細胞的生長曲線、細胞表型、分化能力及OCT4，NANOG的表達與凍存前細胞相比無統(tǒng)計學差異。HAFMSCS體外誘導分化為內(nèi)皮細胞，流式細胞技術分析比較各組誘導后細胞中VWF，CD31，CD133等內(nèi)皮相關標記物抗原的水平，以VEGF和BFGF聯(lián)合誘導組誘導效率最高，MTRIGEL上形成毛細血管結構的能力也最強。低氧環(huán)境下經(jīng)VEGF和BFGF聯(lián)合誘導組的HAFMSCS內(nèi)VEGF，VWF和CD31的MRNA水平高于其余各組，形成毛細血管樣結構的能力也明顯強于其余各組。結論HAFMSCS具有易獲得、體外增殖快、多向分化能力等優(yōu)勢。CHANG培養(yǎng)基兩步培養(yǎng)法能夠在較短時間內(nèi)培養(yǎng)大量的HAFMSCS。短期凍存HAFMSCS對于其生物學特性無明顯影響，最佳的凍存液配方為DMEMFBSDMSO541。VEGF和BFGF聯(lián)合誘導較為理想的體外誘導HAFMSCS分化為內(nèi)皮細胞的誘導方案。低氧能夠促進這一過程，在短期低氧環(huán)境下，HAFMSCS誘導分化為內(nèi)皮細胞的能力與暴露于低氧環(huán)境的時間呈正相關。

簡介：點擊查看更多第一部分 菌株I03A-09005的分離純化、結構鑒定及其生物學活性研究;第二部分 靶向結核桿菌細胞壁的藥物篩選研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：（中國中國圖書資圖書資料分類法分類號）料分類法分類號）單位代碼單位代碼10660R7337學號號S100102貴陽醫(yī)學院貴陽醫(yī)學院2013屆碩士學位論文屆碩士學位論文OSI027及其聯(lián)合自噬及其聯(lián)合自噬抑制劑抑制劑對K562細胞細胞的生物學影響及機制的的生物學影響及機制的研究研究研究生生張建英張建英導師師張亞莉張亞莉教授教授曾小菁曾小菁教授教授年級級2010級專業(yè)業(yè)臨床檢驗診斷學臨床檢驗診斷學2013年5月28日貴陽醫(yī)學院2013屆碩士研究生論文1OSI027及其聯(lián)合自噬及其聯(lián)合自噬抑制劑抑制劑對K562細胞的細胞的生物學影響及機制的生物學影響及機制的研究研究臨床檢驗診斷學研究生張建英導師張亞莉教授曾小菁教授摘要【目的】探討OSI027及其聯(lián)合自噬抑制劑對慢性粒細胞白血病細胞株K562的生物學影響及可能的機制。【方法】常規(guī)方法復蘇、傳代培養(yǎng)待細胞進入對數(shù)分裂期后用于實驗。1藥物對K562細胞生物學影響的初步觀察空白對照組細胞行正常培養(yǎng)，OSI027處理組以01、05、1、5、10、20ΜMOLL濃度的OSI027處理細胞，雷帕霉素（RAPA）處理組以1、5、10、20、50、100NMOLL濃度的RAPA處理細胞，收集處理后的24H、48H、72H細胞，以MTT比色法測定細胞增殖抑制率及半數(shù)抑制濃度（IC50）；倒置相差顯微鏡觀察細胞生長狀況；光學顯微鏡觀察常規(guī)瑞氏染色后細胞形態(tài)變化。2藥物對K562細胞生物學影響的機制研究細胞分為空白對照組（正常培養(yǎng)）、OSI027、RAPA、氯喹（CQ）、OSI027聯(lián)合CQ和RAPA聯(lián)合CQ處理組，收集處理后24H、48H、72H細胞，ANNEXINVFITCPI雙染流式細胞術檢測細胞凋亡；PI單染流式細胞術檢測細胞周期分布；透射電鏡觀察亞細胞結構變化；WESTERNBLOTTING檢測細胞中BCL2、BECLIN1、HIF1Α蛋白的表達情況?！窘Y果】1MTT結果顯示，OSI027對K562細胞有明顯增殖抑制作用，且抑制作用呈劑量時間依賴性，其IC50為6104ΜMOLL；RAPA對K562細胞有一定的增殖抑制作用，IC50為132640NMOLL。2細胞生長狀況觀察顯示，與對照組相比，OSI027處理組出現(xiàn)了細胞數(shù)量減少、顏色變暗、抱團生長和破碎等現(xiàn)象，隨藥物濃度升高和時間延長，上述變化更加明顯；RAPA處理組未出現(xiàn)明顯的生長變化，僅見細胞數(shù)量略微減少等改變。3細胞形態(tài)觀察顯示，與對照相比，OSI027處理組細胞邊緣破碎，體積縮小，胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡，核仁消失，核染色質(zhì)粗糙；RAPA處理組未出現(xiàn)明顯的形態(tài)變化，僅在作用72H時，見細胞核染色質(zhì)變得較粗糙。4細胞凋亡檢測顯示，OSI027可誘導K562細胞凋亡，且效應高于RAPA作用組（P005），當OSI027聯(lián)合CQ作用時主要誘導細胞壞死，壞死率隨處理時間延長而升高，72H達2957180；RAPA對細胞凋亡影響不大，當其聯(lián)合

簡介：本課題研究CDL33造血干／祖細胞的生物學特性，探討其誘導分化和體外擴增，并克隆CDL33基因全長及研制抗人CDL33單克隆抗體，為進一步研究和利用CDL33打下基礎。11臍血CDL33細胞生物學特性的研究。本研究從臍血中磁珠分選獲得CD34CDL33和CD34CDL33兩群細胞，繼而進行體外細胞擴增培養(yǎng)，結果表明兩群細胞均得到顯著擴增。相同擴增體系中CD34CDL33細胞擴增倍數(shù)均高于CD34CDL33細胞。對CD34CDL33細胞擴增后細胞表面抗原譜的動態(tài)變化進行分析顯示，CD34CDL33細胞在擴增過程中向CD34CDL33細胞演變，進而最后分化為CD34CDL33細胞；細胞集落培養(yǎng)表明CD34CDL33細胞體外集落細胞形成多于CD34CDL33細胞，但沒有顯著性差別。但是CD34CDL33細胞以CFUGM集落為主，而CD34CDL33細胞則BFUE集落占多數(shù)代表早期祖細胞的CFUGEMM和HPPCFU的集落數(shù)量在CD34CDL33細胞組顯著高于CD34CDL33細胞組；長期培養(yǎng)啟動細胞測定CD34CDL33細胞遠遠多于CD34CDL33細胞。流式細胞儀檢測CD34CDL33在擴增狀態(tài)下細胞表面粘附分子表達的動態(tài)變化也表明，擴增前后粘附分子沒有顯著改變。綜上所述，本研究顯示CD34CDL33細胞是比CD34CDL33細胞更原始的HSPC。對CD34CDL33細胞擴增后細胞表面抗原表達的動態(tài)變化進行分析提示，CDL33分子可能是早于CD34的HSPC表面標記。同時通過SCFFLTPO細胞因子組合，可以在體外有效對CD34CDL33細胞進行擴增，并且HSPC的擴增對粘附分子的表達沒有明顯的影響，提示體外擴增可能不會對HSPC的遷徙和歸巢造成影響。12臍血CD133細胞重建SCLD小鼠造血的實驗研究SCID小鼠造血重建模型可以進行定量評估人HSPC的生物學特性，并確定HSPC植入SCID小鼠骨髓并重建造血的能力。本研究將CDL33細胞和擴增后的CDL33細胞以及CDL33細胞移植于SCID小鼠，并對造血功能重建進行研究。44只SCID小鼠，移植前所有小鼠均接受30GY60C0照射，進行實驗分組，在輻照后4小時內(nèi)由尾靜脈注射移植細胞CD34CDL33和CD34CDL33細胞。繼而觀察實驗小鼠存活狀況，3周后檢測小鼠骨髓人CD45細胞和人ALU基因。實驗結果顯示移植CD34CDL33細胞小鼠存活率明顯高于移植CD34CDL33細胞小鼠；在移植新分離和培養(yǎng)擴增CD34CDL33細胞的小鼠骨髓中都檢測到CD45細胞和ALU基因的存在。本研究結果表明CD34CDL33細胞具有比CD34CDL33細胞更原始的特性，擴增后的CD34CDL33細胞同樣具有植入SCID小鼠骨髓造血重建的能力。2臍血CDL33細胞誘9分化樹突狀細胞的研究。本實驗就CDL33細胞和CD34細胞擴增誘導DC的能力進行比較，并對CD40分子激發(fā)對誘導DC作用進行研究。從臍血中分離獲得CD34CDL33和CD34CDL33細胞，新分離和擴增后細胞加不同組合的細胞因子，根據(jù)細胞因子組合和加入細胞的不同分組A組CD34CDL33細胞GMCSFIL415天TNFQ69天B組CD34CDL33細胞GMCSFIL415天TNFQ69天；C組擴增7天后CDL33細胞GMCSFIL4卜5天TNFΑ69天；D組CD34CDL33細胞ICD40功能性單抗5C11。對DCS形態(tài)學進行觀察和細胞表型分析以及擴增效率比較，并進行DC與T細胞體外混合淋巴細胞反應試驗。實驗結果顯示除B組外，其余各組細胞數(shù)量均得到有效擴增。以C組擴增效果最為明顯，A、D組則基本相同；對于細胞因子條件相同的A、B組來說，CD34CDL33細胞擴增數(shù)量是CD34CDL33細胞的303倍；各組誘導的細胞均表達CDLΑ、CD83、CD86和HLADR，但A組細胞表達上述分子陽性率遠遠大于B組；C組細胞表達DC相關分子略少于A組但無顯著性差異，D組細胞基本與C組相當，但D組細胞的CDLQ表達率顯著低于A、C兩組；MLR結果表明，各組均具有激發(fā)同種異體T細胞增殖的功能。A、C、D組間無顯著差異，但均高于B組，其中A組是B組的376倍。本實驗結果表明，具有產(chǎn)生功能性DC的前體細胞主要存在于CDL33細胞群，同時通過擴增和誘導兩步法可以獲得大量功能性DC，這表明可采用CDL33細胞來研究DC的分化和發(fā)育的生物學特性；實驗結果也表明，CD40分子激發(fā)可有效地促進CDL33細胞源DC體外擴增和分化，這為體外誘導DC提供了一條新的途徑。3人胎盤來源的間充質(zhì)干細胞對CDL33細胞體外擴增的支持作用。本研究采用胎盤來源的間充質(zhì)干細胞HUMANPLACTENTADERIVEDMESENCHYMALLIKESTEMCELLS，HPMSC觀察其對CDL33HSPC的擴增作用。由胎盤分離培養(yǎng)得到的間充質(zhì)樣細胞具有BMSCS相似的形態(tài)和細胞表面標志細胞形態(tài)呈類似成纖維細胞，免疫熒光標記和流式細胞儀檢測顯示該群細胞表達CD29、CD44和CDL05SH2分子，但不表達CDLLB、CD34、CD45、CDL9、CDL06、HLADR、VVF、CDLL7、FASLCD40、CD40L等。對HPMSCS分泌細胞因子進行檢測發(fā)現(xiàn)，HPMSC分泌SCF、IL6和TNFTT以及分泌大量的SDF1Α，但不產(chǎn)生IL3和GMCSF。CDL33細胞與HPMSCS共培養(yǎng)后，HPMSCS能有效擴增CDL33細胞；并且不同擴增時間細胞表面粘附分子沒有顯著性變化。結果表明胎盤來源的HPMSC可在體外有效擴增HSPC。一方面大大提高了HSPC擴增的數(shù)量和質(zhì)量，另一方面在HSPC歸巢和抑制免疫排斥方面的作用將大大提高移植的成功率。這也表明移植時同時采用同一個體的胎盤源MSC和臍血CDL33細胞完全有可行性，這為臍血干細胞移植開拓了新的途徑，具有重要的使用價值。41001332分子的克隆及其轉(zhuǎn)基因細胞的構建研究表明CDL33可能是較CD34更為有價值的HSPC表面標志，隨著研究的進展，CDL33將在多個方面顯示更重要的價值。本研究旨在克隆人CDL332全長基因，構建其轉(zhuǎn)基因細胞，為制備抗人CDL332單克隆抗體和研究CDL332的生物學功能打下基礎。根據(jù)CDL332基因GENEBANKAF507034序列，以骨髓CDNA文庫為模板，在分段克隆的基礎上采用人工延伸等手段獲得人CDL332基因，裝入PMDL8TVECT載體，轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5A大腸桿菌。重組質(zhì)粒TCDL332經(jīng)測序正確。重組質(zhì)粒TCDL332經(jīng)PCR擴增CDL332全長基因并引入PSTI和BAMHI酶切位點，裝入逆轉(zhuǎn)錄表達載體PGEZTERM，轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5CT大腸桿菌，重組質(zhì)粒PGEZCDL332經(jīng)測序正確。PGEZCDL332、輔助病毒載體PHIT456和PHIT60混合后，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染包裝細胞293T細胞，獲得具有感染能力的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒。將含有完整CDL332重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的293T細胞上清混合WEHI細胞上清，感染L929細胞并進行培養(yǎng)，并用不同濃度的ZEOCINE加壓篩選獲得抗性轉(zhuǎn)基因細胞的基礎上，采用免疫熒光標記和流式細胞儀分析，獲得穩(wěn)定表達CDL332分子的LCDL332轉(zhuǎn)基因細胞。本研究利用高質(zhì)量的CDNA基因文庫提供的高質(zhì)量模板，采用分段克隆的方法，成功克隆CDL332全長基因并構建轉(zhuǎn)基因細胞，為制備抗人CDL332單克隆抗體和進一步研究CDL33的生物學功能奠定物質(zhì)基礎。42CDL332單克隆抗體的研制以L929CDL33細胞作為免疫原，免疫BALB／C小鼠。采用B淋巴瘤雜交瘤技術，將免疫BALB／C小鼠的脾臟細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2／0進行融合，經(jīng)HAT篩選，以L929CDL33篩選抗原，經(jīng)多次亞克隆化及反復篩選，在融合的10塊96孔板中，最終得到1株持續(xù)分泌抗人CDL332單克隆抗體的雜交瘤細胞株1F8。將雜交瘤細胞注入降植烷PRISTANE預致敏的BALB／C小鼠，誘生腹水?？焖俣ㄐ栽嚰垪l分析法結果顯示1F8IG類別為IGGL。以WERIRB1為競爭靶細胞，采用競爭抑制實驗分析1F8識別的抗原位點。實驗結果表明1F8與商品化單抗293C3識別完全不同的位點。選擇多個細胞株DAUDI、RAJI、HL60、WERIRB1、Y79，利用單抗1F8，經(jīng)間接免疫熒光標記分析，檢測結果顯示DAUDI、RAJI、HL60細胞表面均未檢測到CDL33分子表達，而WERIRB1、Y79表面則檢測到CDL33高水平表達。由此表明所研制單抗1F8為特異性抗人CDL33單克隆抗體。

簡介：上海第二醫(yī)科大學博士學位論文腫瘤相關抗原OVA66的細胞生物學功能研究姓名李美星申請學位級別博士專業(yè)免疫學指導教師周光炎葛海良20050501學位論文獨創(chuàng)性聲明Y759884本人所呈交的學位論文是我在導師的指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他個人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出重耍貢獻的個人和集體，均已在文中作了明確說明并表示謝意。作者簽名蕘羔顯日期2望￡17學位論文使用授權聲明本人完全了解上海第二醫(yī)科大學有關保留、使用學位論文蒔規(guī)定，學技有權保留學位論文并向國家主管部門或其指定機構送交論文的電子版幫紙質(zhì)版。有權將學位論文用于非贏利目的的少量復制并允許論文進入學校圖書館被查閱。有權將學位論文的內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索。有權將學位論文的標題錄摘要匯編出版。保密的學位論文在解密后學位論文作者簽名駕笑吊日期2生。皇17隰刮≥P曠

簡介：中國醫(yī)科大學碩士學位論文應用消減雜交技術研究非小細胞肺癌基因表達譜的變化和TIG2基因生物學功能的研究姓名王紹成申請學位級別碩士專業(yè)細胞生物學指導教師趙雨杰20050501J亟匣應用消減雜交技術研究非小細胞肺癌基因表達譜的變化和7ⅡG2基因生物學功能的研究隨著人類基因組測序的逐步完成，功能基因組的研究成為今后的主要研究方向之一。我們采用消減雜交技術SUBTRAETIVEHYBRIDIZATION篩選與肺癌發(fā)生、發(fā)展相關的功能基因，通過臨床病人肺癌組織與其癌旁正常組織基因表達譜的變化，構建差異表達的CDNA文庫，經(jīng)測序和RTPCR驗證，篩選出與肺癌有重要貢獻的一組基因。我們從中選擇ⅡG2TAZAROTENEINDUCEDGENE2基因深入研究其對肺癌發(fā)生、發(fā)展的作用。經(jīng)RTPCR，我們發(fā)現(xiàn)TIG2MRNA在肺癌細胞中低表達或沉默，而在正常肺細胞呈程序性中表達。從正常肺細胞WI一38中克隆TIG2CDNA，通過體外構建哺乳動物表達重組質(zhì)粒PFLAGCMV／TIG2；PCINEO／ⅡG2，然后分別轉(zhuǎn)染肺癌細胞A2，LH7，免疫熒光揭示TIG2編碼蛋白主要定位于細胞質(zhì)內(nèi)，且分泌出去。培養(yǎng)的肺癌細胞A2，LH7，BEL經(jīng)維甲酸不同濃度處理，發(fā)現(xiàn)11G2基因仍表達沉默，因此，肺癌細胞32，LH7，BEL是維甲酸無應答細胞；然后經(jīng)去甲基化試劑5一A齟一CDR處理后，發(fā)現(xiàn)TIG2基因獲得重新表達，因此，推斷TIG2基因在肺癌細胞中表達沉默與DNA甲基化有關，經(jīng)CPG島軟件預測，發(fā)現(xiàn)弧G2基因調(diào)控區(qū)存在CPG島，文獻報道，在肺癌細胞中，維甲酸受體BRAR8常出現(xiàn)甲基化，抑制其表達，所以，NG2基因的表達沉默可能與RARB和／或ⅡG2甲基化有關。對穩(wěn)定轉(zhuǎn)染’NG2CDNA的肺癌細胞株LH7一TIG2功能變化作深入研究，流式細胞儀分析其細胞周期，與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染相應空載質(zhì)粒肺癌細胞株LH7一MOCK比較，發(fā)現(xiàn)G。期細胞數(shù)明顯增加25％_49％，G2／M期明顯下降1818％鶇00％；LH7一’NG2細胞增殖和侵襲能力明顯減弱等。同時，田G2基因的表達使ERK2P42活性降低或消失。綜合以上實驗結果初步1

簡介：重慶醫(yī)科大學碩士學位論文人乳腺癌腫瘤干細胞的分離培養(yǎng)及生物學特性之初探姓名莫敖申請學位級別碩士專業(yè)外科學（普通外科）指導教師吳誠義20070401重慶醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的論文是我本人在導師指導下進行的研究X作及取得的研究成果．據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得重慶醫(yī)科大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，與我同．32作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意．申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任．學位論文作者簽名起啡碑坪學位論文版權使用授權書本人完全了解重慶醫(yī)科大學有關保護知識產(chǎn)權的規(guī)定，即研究生在攻讀學位期閶論文工作的知識產(chǎn)權單位屬壁慶醫(yī)科大學．本人保證畢韭高校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為重慶醫(yī)科大學．學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱．學校可以公布學位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外?？梢圆捎糜坝?，縮印或其他手段保存論文．論文作者簽名指導教師簽名日期

簡介：第一部分PEG交聯(lián)去細胞瓣復合材料構建及其體外生物相容性目的PEG交聯(lián)去細胞瓣構建復合材料，并評價其體外生物相容性。方法（1）合成功能團為丙烯?；闹癄頟EG，同時在去細胞瓣上引入巰基，通過丙烯?；c巰基發(fā)生邁克爾加成反應，構建PEG交聯(lián)去細胞瓣復合材料。（2）生物力學測試評價PEG交聯(lián)對去細胞瓣機械性能的影響；CCK8法檢測復合材料浸提液對人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖率影響，以評價其生物相容性。結果復合材料構建條件溫和、效果確切；復合材料抗拉強度明顯高于去細胞瓣，且與天然瓣膜抗拉強度相比，差異無統(tǒng)計學差異。復合材料與去細胞瓣毒性評級均為0級，與陰性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義；人臍靜脈內(nèi)皮細胞在含復合材料浸提液的培養(yǎng)液中形態(tài)良好，增殖旺盛。結論PEG交聯(lián)去細胞瓣的方法能夠構建與天然瓣膜相似抗拉強度且無細胞毒性的復合材料。第二部分PEG交聯(lián)去細胞瓣多信號復合材料構建第一節(jié)構建RGD復合材料目的評價PEG交聯(lián)去細胞瓣復合材料結合粘附肽（精甘天冬氨酸RGD肽）的可行性和有效性。方法復合材料與1ML不同濃度（15MGML，1MGML，05MGML，025MGML）GRGDSPC肽溶液在37℃反應，在不同時間點（1H，2H，4H），用分光光度法檢測復合材料結合GRGDSPC肽質(zhì)量，并行免疫熒光定性檢測，去細胞瓣作為陰性對照。結果GRGDSPC肽能有效地結合于復合材料，且一片復合材料與1MLGRGDSPC肽（1MGML）在37℃條件下反應2H，結合GRGDSPC肽質(zhì)量最大為（079±001）MG。結論PEG交聯(lián)去細胞瓣復合材料，能夠在體外有效地結合RGD肽，構建RGD復合材料。第二節(jié)構建VEGF復合材料目的評價PEG交聯(lián)去細胞瓣復合材料結合血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）的可行性和有效性。方法復合材料與1ML不同濃度（500PGML，1000PGML，2000PGML）VEGF溶液在37℃反應，在不同時間點（1H，2H，4H，12H），用ELISA法檢測復合材料結合VEGF質(zhì)量，并行免疫熒光檢測，去細胞瓣作為陰性對照。結果VEGF能有效地結合于復合材料，且一片復合材料與1MLVEGF（1000PGML）在37℃反應4H，其結合VEGF質(zhì)量最大為（89687±327）PG。結論PEG交聯(lián)去細胞瓣復合材料，能夠在體外有效地結合VEGF，構建VEGF復合材料。第三節(jié)構建PEG交聯(lián)去細胞瓣多信號復合材料目的評價PEG交聯(lián)去細胞瓣復合材料同時結合RGD肽和VEGF的可行性和有效性。方法復合材料與1ML反應液（包含1MGMLGRGDSPC肽和1000PGMLVEGF）在37℃反應4H，對反應后復合材料行免疫熒光檢測，去細胞瓣作為陰性對照。結果GRGDSPC肽和VEGF能同時有效地結合于復合材料。結論PEG交聯(lián)去細胞瓣復合材料，能夠在體外有效地結合RGD肽和VEGF，構建PEG交聯(lián)去細胞瓣多信號（RGD、VEGF）復合材料。第三部分PEG交聯(lián)去細胞瓣多信號復合材料生物學性能研究第一節(jié)內(nèi)皮祖細胞分離、培養(yǎng)與鑒定目的分離、培養(yǎng)、鑒定臍帶血內(nèi)皮祖細胞，為其作為組織工程種子細胞提供實驗依據(jù)。方法密度梯度離心法分離新鮮臍血中單個核細胞，在含堿性成纖維細胞生長因子和血管內(nèi)皮生長因子培養(yǎng)液中培養(yǎng)，通過形態(tài)學、免疫熒光和流式細胞儀等對貼壁細胞進行鑒定；并與臍靜脈內(nèi)皮細胞進行增殖和遷移能力比較。結果隨培養(yǎng)時間延長，貼壁細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，從小圓變成梭形，逐漸形成特征性克隆和典型成熟內(nèi)皮細胞鵝卵石樣形態(tài)；體外培養(yǎng)7天后，90％以上貼壁細胞呈DILACLDL和FITCUEAI雙染陽性；貼壁細胞流式細胞儀分析顯示培養(yǎng)7D的細胞VEGFR2、CD34和CD133表達分別占7735±486％、5242±664％和1936±214％，培養(yǎng)28天的細胞VEGFR2和CD34表達分別占8106±731％和762±314％，而未檢測到CD133表達；人內(nèi)皮祖細胞增殖和遷移能力明顯高于人臍靜脈內(nèi)皮細胞。結論用密度梯度離心法和貼壁篩選法，可成功分離出臍帶血內(nèi)皮祖細胞，該方法簡單、經(jīng)濟、可行；且內(nèi)皮祖細胞可向內(nèi)皮細胞分化，增殖和遷移能力強，有望成為理想種子細胞。第二節(jié)PEG交聯(lián)去細胞瓣多信號復合材料生物學性能測定目的研究PEG交聯(lián)去細胞瓣多信號（RGD、VEGF）復合材料對內(nèi)皮祖細胞粘附和增殖的影響，為進一步構建TEHV提供依據(jù)。方法A組去細胞瓣，B組PEG交聯(lián)去細胞瓣復合材料，C組VEGF復合材料，D組為RGD復合材料，E組PEG交聯(lián)去細胞瓣多信號（RGD、VEGF）復合材料。然后在各組材料上種植EPCS，分別在種植后2H、4H、8H用細胞計數(shù)和3HTDR摻入法檢測各組材料上細胞數(shù)和每分鐘脈沖數(shù)，反映EPCS在各組材料上粘附性；分別在種植后2D、4D、8D，用細胞計數(shù)和3HTDR摻入法檢測各組瓣膜支架上細胞數(shù)和每分鐘脈沖數(shù)，反映各組材料上EPCS增殖情況。在種植8D時，取各組瓣膜支架行蘇木素伊紅染色和掃描電鏡，以檢測EPCS在各組材料上生長情況，并取E組支架材料上細胞行RTPCR檢測TPA和ENOS的表達，以評價新內(nèi)皮抗血栓形成功能。結果（1）種植后2H、4H、8H時各組細胞數(shù)和每分鐘脈沖數(shù)為D組＞E組＞C組＞A組＞B組，其中A組與B組之間各個時間點均無統(tǒng)計學差異（P＞005）8H時D組與E組之間的差異無統(tǒng)計學意義（P＞005），其余時間點各組之間的差異均有統(tǒng)計學意義（P＜005）。（2）種植2D、4D、8D時各組細胞數(shù)和每分鐘脈沖數(shù)為A組均大于B組（P＞005），C組、D組和E組均大于同一時間點A組和B組（P＜005）；種植2D時，E組＞C組（P＜005），D組＞E組（P＞005）；種植4D時，E組＞D組（P＜005），D組＞C組（P＜005）；種植8D時，E組＞D組（P＜005），D組＞C組（P＞005）。（3）蘇木素伊紅染色和掃描電鏡檢測顯示種植8D后，與其它組相比，E組瓣膜支架上可見一致密融合細胞層，并且該新內(nèi)皮層細胞TPA和ENOS表達與人臍靜脈內(nèi)皮細胞相似。結論PEG交聯(lián)去細胞瓣多信號（RGD、VEGF）復合材料上RGD肽和VEGF，能夠協(xié)同促進內(nèi)皮祖細胞在復合材料上粘附和增殖，有利于TEHV構建。

簡介：目的成纖維細胞的生物學特性改變是皮膚衰老、皺紋出現(xiàn)的基礎。衰老成纖維細胞的生物學特性改變包括細胞增殖周期改變，細胞凋亡率增加，膠原代謝異常，彈性蛋白含量減少等。本研究擬探討黃芪甲苷對人皺紋、非皺紋皮膚成纖維細胞、老年皮膚成纖維細胞的影響。從細胞水平揭示皮膚衰老的本質(zhì)，為進一步探討皮膚衰老機制和開發(fā)抗衰老護膚品提供新思路方法取相同年齡段面部皮膚皺紋與非皺紋深處的成纖維細胞；及不同年齡段面部相同部位的皮膚成纖維細胞，建立單層細胞培養(yǎng)體系，并將成纖維細胞分別按部位、年齡分組。選擇生長狀態(tài)良好的三株皮膚成纖維細胞1例中年男性非皺紋皮膚39歲，1例中年男性皺紋皮膚47歲，1例老年男性面頰皮膚75歲，分別加入不同濃度的黃芪甲苷，干預24H，72H，120H后，用四甲基偶氮唑鹽MTT法檢測三株皮膚成纖維細胞的增殖活性；用免疫組化法檢測三株皮膚成纖維細胞Ⅰ型膠原蛋白，Ⅲ型膠原蛋白和彈性蛋白的表達；用流式細胞儀檢測三株皮膚成纖維細胞的凋亡率。結果1黃芪甲苷濃度為5ΜGML～20ΜGML時，可明顯促進皺紋和非皺紋皮膚成纖維細胞的增殖，10ΜGML作用最明顯。2黃芪甲苷濃度為10ΜGML時，可以促進皺紋、非皺紋皮膚成纖維細胞和老年皮膚成纖維細胞Ⅰ型膠原表達，120小時作用最明顯。3黃芪甲苷濃度為10ΜGL時，作用120小時后，皺紋和非皺紋皮膚成纖維細胞凋亡率均有明顯下降P＜001。結論黃芪甲苷在一定濃度時具有改善人皺紋和非皺紋皮膚成纖維細胞生物學特性的作用，表明該藥既能預防皺紋出現(xiàn)，對已經(jīng)形成的皺紋也有一定的改善作用。本研究為黃芪甲苷運用于醫(yī)學美容界延緩皮膚衰老、預防皺紋形成提供了細胞水平的實驗室客觀依據(jù)。

簡介：分類號R7396密級單位代碼10312學號20121580南京醫(yī)科犬掌碩士學位論文題目E墾Y墜叢里2△透昱盎塑疸細胞鯉塑盟墓生物堂接連的髭響研究生指導教師學科專業(yè)學院名稱完成時間陳志陳仁杰教授耳鼻咽喉科學南京醫(yī)科大學第二臨床醫(yī)學院二。一五年五月目錄中文摘要L英文摘要4前言7研究一高表達EB病毒編碼LMP2A基因鼻咽癌細胞株的構建及鑒定前言10材料與方法10結果20討論23研究二LMP2A誘導鼻咽癌細胞上皮問質(zhì)轉(zhuǎn)化和對其生物學特性的影響前。言25材料與方法25結果32討論38小結41參考文獻42文獻綜述46參考文獻52附錄縮略語58攻讀學位期間發(fā)表的論文60致謝6L

簡介：研究生個人簡介姓名紀建永性別男年齡28歲學習及工作經(jīng)歷時間單位及職務200907畢業(yè)于泰山醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)，獲醫(yī)學學士學位201009考入徐州醫(yī)學院攻讀神經(jīng)外科碩士學位研究生期間臨床、科研成果及獲獎情況‘時間一一項目2011年臨床培訓12個月2012年通過國家執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格考試，通過CET62013年研究生期間修滿20學分，核心期刊發(fā)表文章一篇徐州醫(yī)學院碩士學位論文縮略詞ACR姆BCPBISBSACCK8D1H20D～匝MDMSOFBSFNNBTNCODPA、EPBSPMSFRPMISDSS垠NATEMEDACRYLAMIDE縮略詞表ABBREVIATIONALKALINEPHOSPHATASE5_BROMOMCHLOM3INDOLYLPHOSPHATEBISACRYAMIDEBOVINEELUNLALBUMINCELLCOUNTINGKIT8DOUBLEDISTILLEDWATERDULBECCO’SMODIFIEDEAGLEMEDIADIMETHYLSULFOXIDEFETALBOVINESERUMFIBRONECTINNITROBLUETETRAZOLIUMNITROCELLULOSEOPTICALDENSITYPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESISPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPHENYLMETHYLSULFONYLFLUORIDEROSWELLPARKMEMORIALINSTITUTESODIUMDODECYLSULFATESMALLINTERFERINGRN_ATETRAMETHYLETHYLENEDIAMINE中文全稱丙烯酰胺單體堿性磷酸酶5溴4氯3吲哚磷酸丙烯酰胺雙體牛血清白蛋白細胞增殖檢測試劑盒雙蒸水DULBECCO改良培養(yǎng)基二甲基亞砜胎牛血清纖維連接蛋白氮蘭四唑硝酸纖維素光密度聚丙烯酰胺凝膠電泳磷酸鹽緩沖液苯甲基磺酰氟洛斯維公園紀念研究所十二烷基磺酸鈉小干擾RNA四甲基乙二胺

簡介：蘇州大學學位論文獨創(chuàng)性聲明』749839本人鄭重聲明所提交的學位論文是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學或其它教育機構的學位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。論文作者簽名送數(shù)日蘇州大學學位論文使用授權聲明㈣㈣㈣㈣FFJ『『『『『J10Y173339I‘本人完全了解蘇州大學關于收集、保存和使用學位論文的規(guī)定，即學位論文著作權歸屬蘇州大學。本學位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致口蘇州大學有權向國家圖書館、中國社科院文獻信息情報中心、中國科學技術信息研究所含萬方數(shù)據(jù)電子出版社、中國學術期刊光盤版電子雜志社送交本學位論文的復印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存和匯編學位論文，可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索。涉密論文口本學位論文屬在年一月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名遂，邀日導師簽名日期

簡介：點擊查看更多體外培養(yǎng)人胎肝細胞與永生化L-02肝細胞的生物學性狀比較.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：蘭州大學碩士學位論文人參皂甙RG1對人牙周膜細胞生物學活性及大鼠牙周組織相關細胞因子表達的影響姓名楊倩申請學位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學指導教師余占海20090601蘭州大學碩士學位論文3、人參皂甙RGL對牙周膜細胞蛋白含量的影響與對照組相比人參皂甙RGL001／TMOL／L，O05／ZMOL／L，01／MOL／L組72小時細胞培養(yǎng)液中蛋白含量均明顯高于對照組P005。4、人參皂甙RGL對牙周膜細胞√蝴活性的影響與對照組相比人參皂甙RGL001／TMOLFL，005MOL／L，01／ZMOL／L組72小時細胞培養(yǎng)液中ALP活性均明顯高于對照組尸005。5、人參皂甙RGL對牙周膜細胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響人參皂甙RGL001GMOL／L使人牙周膜細胞內(nèi)游離鈣離子降低，最后維持在比加藥前低的靜息鈣水平上。6、人參皂甙R91對細胞周期的影響FCM檢測顯示經(jīng)001／TMOL／I人參皂甙RGL作用48H后，牙周膜細胞G1期細胞降低P005，S期細胞升高且細胞增殖指數(shù)PRI值SG2／M％顯著增高P005。7、大鼠實驗性牙周炎動物模型的成功建立動物采用牙間結扎加激素注射第4天后便出現(xiàn)了進食減少、倦怠少動等表現(xiàn)，符合中醫(yī)腎虛的癥狀，并且出現(xiàn)了牙槽骨疏松、牙槽嵴吸收、牙周袋形成等病理性改變。正常組大鼠則無上述表現(xiàn)。牙周炎組牙周組織中BGP表達明顯低于正常組，IL6表達明顯高于正常組P005。8、人參皂甙RGL對大鼠牙周組織中有關細胞因子表達的影響從治療第二周起，治療組較牙周炎對照組牙周組織中的BGP水平明顯升高尸005；治療第三周起，治療組較對照組牙周組織中的IL6水平顯著降低P005，經(jīng)治療后的實驗動物全身狀況也顯著改善。結論玻片覆蓋法可顯著提高人牙周膜細胞原代培養(yǎng)的成功率。人參皂甙RGL在一定濃度范圍內(nèi)能提高牙周膜細胞的增殖活性、蛋白合成及堿性磷酸酶活性。人參皂甙RGL使牙周膜細胞G1期細胞減少，S期細胞增加，細胞增殖指數(shù)PRI值SG2／M％增高，促進更多的細胞進人增殖狀態(tài)，且人參皂甙RGL可能通過改變細胞內(nèi)游離鈣離子的濃度，達到其促進細胞增殖的作用。牙間結扎加糖皮質(zhì)激素注射的方法可成功地建立近似于人類臨床牙周炎的動物模型，為下～步研究中藥防治牙周炎提供了很好的實驗基N