神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中ZBTB-38基因?qū)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬過程的作用機(jī)制.pdf

1、CIBZ，即ZBTB-38蛋白，對(duì)caspase-3有抑制作用，caspase-3是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志基因之一，也就是說CIBZ應(yīng)具有一定的抗凋亡作用。眾所周知，細(xì)胞凋亡的發(fā)生與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬均有十分緊密的關(guān)系，對(duì)于細(xì)胞而言，適度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用的發(fā)生，反而在一定程度上對(duì)自身起到了保護(hù)的效果，但是在長(zhǎng)時(shí)間和高強(qiáng)度地發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的情況下不僅不能夠產(chǎn)生保護(hù)作用反而可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生。自噬是囊泡包裹自身受損蛋白和老化細(xì)胞器，然后與溶酶體融合

2、形成自噬體，并降解其包裹內(nèi)容物的過程，通過這種方式可以完成細(xì)胞生命過程中的新陳代謝以及某些受損或者老化細(xì)胞器的更新，這個(gè)過程是一種自我消化作用，而且在進(jìn)化上是高度保守的。
　　本研究將ZBTB-38基因通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)該細(xì)胞，同時(shí)在空白組中加入LipoHigh脂質(zhì)體。轉(zhuǎn)染結(jié)束后分別提取實(shí)驗(yàn)組和空白組的的總RNA和蛋白質(zhì)樣品，同時(shí)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過半定量RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫熒光和蛋白質(zhì)印跡等手段進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果顯示，實(shí)

3、驗(yàn)組中ZBTB-38基因表達(dá)出現(xiàn)顯著降低；與凋亡有關(guān)的caspase-3和p21基因的表達(dá)有所上升；與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)的GRP78和ERdj4基因，PDI和p-eIF2α蛋白的表達(dá)有所上升；與自噬有關(guān)LC3B和p62蛋白的表達(dá)均有所下降。在細(xì)胞凋亡的過程中caspase家族成員有著重要的作用，尤其是線粒體通路中，存在一類通路是需要活化的caspase-3才能引起細(xì)胞凋亡。而本實(shí)驗(yàn)中的CIBZ對(duì)caspase-3有抑制作用，通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分