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文檔簡介
1、目的:探討在機(jī)械應(yīng)力誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡的過程中,細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)表達(dá)情況及兩者在此作用過程中的相互作用關(guān)系
方法:分離培養(yǎng)人膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,用應(yīng)力加載系統(tǒng)分別將培養(yǎng)的細(xì)胞加載0h,6h,12h,24h和48h,分別在各受力組中加入抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)和半胱氨酸蛋白酶12(caspas
2、e12)特異性抑制劑Z-ATAD-FMK作為抑制劑組,應(yīng)用RT-PCR檢測各組細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因 Bcl-2、Bcl-2相關(guān) x蛋白(Bcl, associatedX protein,Bax)及caspase12 mRNA表達(dá)量;western blot檢測各組細(xì)胞中Caspase-12蛋白表達(dá)量;DCFH-DA法檢測細(xì)胞中ROS的含量;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率。
結(jié)果:RT-PCR檢測6 h受力組Bax和caspase-12
3、相對表達(dá)量增加,24 h達(dá)峰值,48 h有所回降,而Bcl-2相對表達(dá)量6 h后開始下降,12 h降到最低,24 h開始回升;ROS含量結(jié)果檢測6h受力組表達(dá)量增加,24h達(dá)到峰值,48h有所回落;NAC抑制劑組 ROS、Bax、caspase-12表達(dá)量均下降,Bcl-2升高。Z-ATAD-FMK抑制劑組caspase-12表達(dá)量下降,而ROS表達(dá)量不變,Western-Blot檢測caspase-12蛋白表達(dá)與相應(yīng)基因表達(dá)趨勢相一致
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