應(yīng)力誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中活性氧與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討在機(jī)械應(yīng)力誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡的過程中，細(xì)胞內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress,ERS）表達(dá)情況及兩者在此作用過程中的相互作用關(guān)系
　　方法：分離培養(yǎng)人膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，用應(yīng)力加載系統(tǒng)分別將培養(yǎng)的細(xì)胞加載0h,6h,12h,24h和48h，分別在各受力組中加入抗氧化劑N－乙酰半胱氨酸（NAC）和半胱氨酸蛋白酶12（caspas

2、e12）特異性抑制劑Z-ATAD-FMK作為抑制劑組，應(yīng)用RT-PCR檢測各組細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因 Bcl-2、Bcl-2相關(guān) x蛋白(Bcl, associatedX protein，Bax)及caspase12 mRNA表達(dá)量；western blot檢測各組細(xì)胞中Caspase-12蛋白表達(dá)量;DCFH-DA法檢測細(xì)胞中ROS的含量；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果：RT-PCR檢測6 h受力組Bax和caspase-12

3、相對表達(dá)量增加，24 h達(dá)峰值，48 h有所回降，而Bcl-2相對表達(dá)量6 h后開始下降，12 h降到最低，24 h開始回升；ROS含量結(jié)果檢測6h受力組表達(dá)量增加，24h達(dá)到峰值，48h有所回落；NAC抑制劑組 ROS、Bax、caspase-12表達(dá)量均下降，Bcl-2升高。Z-ATAD-FMK抑制劑組caspase-12表達(dá)量下降，而ROS表達(dá)量不變，Western-Blot檢測caspase-12蛋白表達(dá)與相應(yīng)基因表達(dá)趨勢相一致