2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究自噬激活在體外培養(yǎng)的小鼠皮層神經(jīng)元缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)中的作用,探討神經(jīng)元缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)模型中自噬與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、熱休克蛋白HSP70之間的關(guān)系。
   方法:采用兩次OGD(oxygen glucose deprivation)法建立小鼠皮層神經(jīng)元體外缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)模型:首次預(yù)缺糖缺氧(IPC)時(shí)間為30min,之后給予神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)液實(shí)現(xiàn)再灌,24h后再次行致死性O(shè)GD1h、3h、6h;在預(yù)缺糖缺氧時(shí)給予自噬抑制劑3-me

2、thyladenine(3-MA,5、10、20 mM),通過LDH漏出率檢測3-MA對缺糖缺氧引起的神經(jīng)元損傷的影響,MDC法觀察神經(jīng)元自噬活性,免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測LC3蛋白的表達(dá)。Western Blot法檢測自噬溶酶體途徑相關(guān)蛋白LC3、Beclin-1、P62蛋白,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP、caspase-12及熱休克蛋白HSP70的表達(dá)。
   結(jié)果:Western Blot結(jié)果證實(shí)了IPC時(shí)LC3及Be

3、clin1的表達(dá)上調(diào),LDH結(jié)果以及顯微鏡觀察顯示缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)可誘導(dǎo)神經(jīng)保護(hù)作用;但3-MA(10mM)用于缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)的過程中,則顯著加重了細(xì)胞的損傷,提示自噬抑制劑取消了缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)誘導(dǎo)的神經(jīng)保護(hù)作用。MDC結(jié)果顯示IPC3h組(缺糖缺氧30min后再灌注3h)自噬顆粒明顯高于OGD3h組,IPC+OGD3h組高于OGD3h組,而3MA+IPC+OGD3h組自噬顆粒減少;Western Blot結(jié)果顯示IPC+OGD3h組,L

4、C3和Beclin1的表達(dá)升高(與OGD組相比,P<0.01),3-MA(10mM)明顯降低了LC3和Beclin1的表達(dá)(與IPC+OGD3h組相比,P<0.01)。同時(shí)IPC3h及IPC+OGD3h組,P62的表達(dá)降低(與OGD3h組相比,P<0.05),3-MA(10mM)明顯增強(qiáng)了P62的表達(dá)(與IPC+OGD3h組相比,P<0.05),提示3-MA阻斷缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)的神經(jīng)保護(hù)作用與抑制自噬有關(guān)。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示,IPC3h

5、及IPC+OGD3h組,LC3的表達(dá)均上調(diào)(與OGD3h組相比,P<0.01),3-MA(10mM)明顯抑制LC3的表達(dá)(與IPC+OGD3h組相比,P<0.01)。Western Blot結(jié)果顯示,IPC+OGD3h組,HSP70和GRP78的表達(dá)均上調(diào)(與OGD3h組相比,P<0.01),3-MA(10mM)明顯抑制HSP70和GRP78的表達(dá)(IPC+OGD3h組相比,P<0.01);IPC+OGD3h組,CHOP和caspase

6、-12的表達(dá)均下降(與OGD3h組相比,P<0.01),3-MA(10mM)明顯增加CHOP和caspase-12的表達(dá)(IPC+OGD3h組相比,P<0.01。提示缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)產(chǎn)生的神經(jīng)保護(hù)作用與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。
   結(jié)論:1.缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)能誘導(dǎo)神經(jīng)元自噬激活。2.自噬抑制劑3-MA能阻斷缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)對神經(jīng)元的保護(hù)作用,說明缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)的神經(jīng)保護(hù)作用可能是通過自噬-溶酶體途徑實(shí)現(xiàn)的。3.缺糖缺氧預(yù)適應(yīng)能誘導(dǎo)ER應(yīng)激,

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