內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在應力介導的成肌細胞凋亡中的作用及其機制.pdf

1、摘要目的：功能矯形是口腔正畸醫(yī)生進行牙齒矯正治療的一項重要輔助治療手段。臨床上正畸醫(yī)生通過功能矯形對面部畸形的青少年患者進行矯正。隨著應力的刺激面頜部肌肉組織發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能上的改變，進而使口腔畸形得以矯正。面頜部肌肉組織發(fā)生改建的基礎(chǔ)是細胞，應力刺激細胞從而引起一系列生物反應，但是它是如何發(fā)生一系列反應的，這就需要我們深入的探索。細胞凋亡是細胞內(nèi)一種程序性死亡方式，死亡受體活化和線粒體損傷途徑是細胞內(nèi)兩條經(jīng)典的凋亡途徑，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是近年

2、來發(fā)現(xiàn)的一條新途徑。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細胞內(nèi)重要的細胞器，能夠調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成、細胞應激反應等。但是在病理或生理條件下如鈣離子的流失、蛋白表達受抑制等會引起未折疊蛋白或錯誤折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)聚集、損傷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常生理功能引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激最初不會引起細胞損傷，在UPR調(diào)整下可以修復細胞但是損傷太過嚴重就會導致細胞發(fā)生反應并引起凋亡。本實驗我們在體外構(gòu)建完善的大鼠L6成肌細胞力學刺激模型的前提下：探討應力對大鼠L6成肌細胞的影響，應力是否因引

3、起成肌細胞凋亡；研究應力是否引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激；在前兩個實驗研究結(jié)果的基礎(chǔ)上檢驗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是否引起成肌細胞凋亡發(fā)生凋亡的其具體機制是什么。通過上述研究了解功能矯形的微觀分子機制并為臨床正畸治療提供理論指導意義。方法：在體外實驗中，我們采用成肌細胞株(品種為大鼠L6購自中國科學院)作為實驗對象；采用多通道細胞應力加載系統(tǒng)在成功構(gòu)建體外成肌細胞力學刺激模型模型的基礎(chǔ)上，對所培養(yǎng)的細胞持續(xù)施加一定時間的周期性張應力(Oh、lh、6h、12h、24

4、h)最后使其發(fā)生周期性張應變(加載力值15％，加載頻率10cycles／min)，設(shè)Oh組為對照組與其它組在同一環(huán)境下培養(yǎng)；采用Hoechst33258熒光染色以及DAPI染核觀察細胞凋亡情況；利用倒置熒光顯微鏡從形態(tài)學上觀察不同持續(xù)時間的張應力對細胞凋亡的影響并；通過流式細胞術(shù)分析細胞的凋亡率；采用RTPCR和WestemBlotting檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶分子GRP78／BIP，檢測應力是否引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激；RT—PCR和WesternBl

5、otting檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激引起的細胞凋亡相關(guān)分子CHOP和Caspase12的表達變化；應用Caspase12特異性抑制劑zATADfmk和Caspase3特異性抑制劑zDEVD—fmk來明確Caspase12和Caspase3在應力介導的成肌細胞中的作用，以及二者之間的關(guān)系；采用統(tǒng)計軟件SPSSl80對以上實驗數(shù)據(jù)進行相應的統(tǒng)計學分析。碩士研究生劉麗娟(口腔正畸學)指導老師袁曉教授關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激；CHOP；周期性張應力；成肌細胞：