發(fā)夾型DNA熒光探針設(shè)計(jì)新方法研究.pdf

1、隨著第一臺(tái)核酸合成儀的誕生和DNA化學(xué)合成、標(biāo)記技術(shù)取得的重大突破,核酸分子探針的應(yīng)用得到了飛速發(fā)展。由于核酸探針設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好、易于合成、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制靈活,因而被廣泛的應(yīng)用到化學(xué)、醫(yī)學(xué)和生物學(xué)等領(lǐng)域。至今,核酸探針已經(jīng)發(fā)展出許多類(lèi)型,如經(jīng)典的RNA探針、cDNA探針及基因組DNA探針等,新型的陰陽(yáng)探針、TaqMan探針、Padlock探針、核酸識(shí)體(aptamer)探針、分子信標(biāo)探針等。自從Tyagi和Krammer于1996年發(fā)

2、明分子信標(biāo)探針以來(lái),發(fā)夾型的核酸探針作為一種高選擇性和高靈敏性的新型熒光探針得到了廣泛的應(yīng)用。隨著對(duì)發(fā)夾型核酸探針研究的深入及新型發(fā)夾型核酸探針的出現(xiàn),人們發(fā)現(xiàn)發(fā)夾型核酸探針不僅適用于體外蛋白質(zhì)和核酸的分析,同樣也適用于活體分析。它還可以用于核酸與藥物小分子、蛋白質(zhì)等相互作用的研究,是一種極好的研究核酸與蛋白質(zhì)相互作用的工具,也是一種極具發(fā)展前景的新型核酸探針。發(fā)夾型核酸探針與傳統(tǒng)的核酸探針相比,能很好的分辨單堿基錯(cuò)配,且能用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)

3、。核酸探針的標(biāo)記物有生物素、放射性物質(zhì)和熒光基團(tuán)等。其中,熒光分子標(biāo)記由于對(duì)生物分子影響較小、靈敏度高、且分析檢測(cè)手段簡(jiǎn)單,成為最常用的標(biāo)記物。
　　 本文著眼于發(fā)夾型DNA熒光探針新方法的研究,主要進(jìn)行了以下三個(gè)方面的工作：⑴基于時(shí)間分辨熒光技術(shù),設(shè)計(jì)了一種利用銪離子配合物作為熒光基團(tuán)的發(fā)夾型熒光探針。由于銪離子配合物的熒光壽命長(zhǎng),用于生物樣品檢測(cè)時(shí)能有效消除背景熒光,提高了探針檢測(cè)的靈敏度。⑵基于汞離子與DNA的T堿基的特異