量子點(diǎn)熒光探針用于豬鏈球菌病快速檢測新方法研究.pdf

1、豬鏈球菌病是由豬鏈球菌(SS)引起的一種人畜共患疾病,在豬鏈球菌的35個血清型中以2型(SS2)流行最廣,致病性最強(qiáng),因此發(fā)展和建立基于SS2型重要毒力因子-溶菌酶釋放蛋白(MRP)的豬鏈球菌病快速檢測新方法對于該病的檢測和診斷具有重要意義。量子點(diǎn)作為一種新型熒光探針,在光、電、化學(xué)方面具有很多獨(dú)特的優(yōu)勢,已經(jīng)成為化學(xué)、材料科學(xué)、生命醫(yī)學(xué)和環(huán)境檢測方面的重要研究工具。本論文結(jié)合熒光免疫分析技術(shù),采用量子點(diǎn)-MRP抗體蛋白探針和量子點(diǎn)一兔

2、抗豬IgG探針對豬鏈球菌病進(jìn)行了檢測,主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1.合成了巰基乙酸修飾的CdSe/ZnS核殼量子點(diǎn)并制備了CdSe/ZnS量子點(diǎn)-MRP抗體蛋白探針,利用聚丙烯酰胺凝膠電泳和分子光譜法研究了MRP抗體蛋白與CdSe/ZnS量子點(diǎn)的結(jié)合機(jī)理,結(jié)果表明MRP抗體蛋白與CdSe/ZnS量子點(diǎn)可能通過表面配位作用結(jié)合。熒光光譜法優(yōu)化了CdSe/ZnS量子點(diǎn)-MRP抗體蛋白探針制備的影響因素,建立了一種測定MRP抗原

3、蛋白的新方法,其線性范圍為5.0×10-8～1.5×10-6mol/L,線性相關(guān)系數(shù)為0.998。
　　 2.合成了谷胱甘肽修飾的水溶性CdTe量子點(diǎn),并以EDC·HCl/Sulfo-NHS為共價偶聯(lián)劑制備了基于MRP抗體蛋白的量子點(diǎn)熒光探針。用分子光譜、毛細(xì)管電泳、透射電子顯微鏡和熒光顯微鏡的方法對探針進(jìn)行了表征,結(jié)果表明量子點(diǎn)探針保持著MRP抗體蛋白的生物活性和生物特異性。熒光免疫分析法對MPR抗原蛋白進(jìn)行了檢測,熒光強(qiáng)度與

4、抗原濃度具有很好的線性關(guān)系,線性濃度范圍為5.0×10-8～1.5×10-5 mol/L。與平板計數(shù)法相比,本試驗(yàn)中量子點(diǎn)探針對豬內(nèi)臟血清的檢測也獲得了較滿意的結(jié)果。同時,試驗(yàn)中采用96孔板的方法進(jìn)行檢測,為實(shí)現(xiàn)豬鏈球菌病的高通量檢測提供了重要參考依據(jù)。
　　 3.制備了基于兔抗豬IgG的CdTe量子點(diǎn)探針,并將其用于MRP抗原蛋白和豬內(nèi)臟血清的檢測,結(jié)果表明,該方法對濃度在2.5×10-7～1.5×10-5 mol/L范圍之間

5、的抗原具有較好的線性檢測關(guān)系。對豬內(nèi)臟血清的檢測,本試驗(yàn)的方法與平板檢測法和基于MRP抗體蛋白的量子點(diǎn)探針的檢測方法相比獲得較好的一致性。同時考查了量子點(diǎn)探針的時間穩(wěn)定性,結(jié)果表明制備的量子點(diǎn)探針具有較好的穩(wěn)定性,為豬鏈球菌病檢測試劑盒的制備提供了重要參考依據(jù)。
　　 本研究將量子點(diǎn)探針用于動物重大疾病領(lǐng)域的研究,不僅提供了新穎的、簡單快速的、高通量的豬鏈球菌病檢測方法,還為豬鏈球菌病檢測試劑盒的制備以及量子點(diǎn)熒光探針用于其他動