葡萄與葡萄酒單體酚分析測定方法的研究.pdf

1、葡萄與葡萄酒中酚類物質(zhì)主要分為兩類：非類黃酮(羥基苯甲酸類、羥基肉桂酸類、芪類化合物)和類黃酮(花色苷類、黃烷-3-醇類、黃酮醇類)。這些酚類物質(zhì)是葡萄中重要的次生代謝產(chǎn)物，與葡萄的抗病性、采后運(yùn)輸、貯存、保鮮以及葡萄酒的色澤、風(fēng)味等品質(zhì)指標(biāo)密切相關(guān)(如咖啡酸、兒茶素等)。另外，葡萄與葡萄酒中的酚類物質(zhì)(槲皮素和一些酚酸類)具有很強(qiáng)的抗氧化作用，對人體健康十分有益。所以，對葡萄與葡萄酒中咖啡酸、兒茶素等常見的重要的單體酚的分析檢測具有重

2、要的意義。 目前，高效液相色譜(HPLC)主要用于葡萄與葡萄酒中酚類物質(zhì)的檢測。該方法具有分辨率高、分析速度快、重復(fù)性好、定量分析準(zhǔn)確和精確度高等優(yōu)點(diǎn)。但是由于葡萄與葡萄酒中酚類物質(zhì)種類繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，所以利用HPLC分析測定葡萄與葡萄酒中酚類物質(zhì)時往往會遇到各個酚類物質(zhì)分離困難等問題，這就使得HPLC分析測定前樣品預(yù)處理十分重要。國內(nèi)外利用HPLC測定葡萄與葡萄酒中沒食子酸、兒茶素等幾種常見的單體酚類物質(zhì)的已有報道，但是利用H

3、PLC測定時樣品前處理方法的研究報道則很少且沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。本論文研究的目的在于建立利用HPLC同時測定葡萄與葡萄酒中咖啡酸、兒茶素等幾種重要的單體酚類物質(zhì)時樣品前處理的方法。 獲得的主要研究結(jié)果如下： 1.葡萄中單體酚的分析測定方法 (1)葡萄中單體酚的提取方法取赤霞珠葡萄果實(shí)5 g研磨后溶于25 mL70％甲醇中，加入80 mg抗壞血酸(溶于15 mL純水中)，再加入10 mL6 mol鹽酸，將所有溶液置于1

4、00 mL，的容量瓶中，超聲波處理10 min，密閉后在35℃條件下避光提取12 h，12000xg 4℃離心20 min，將上清液在40℃條件旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去掉甲醇，用30 mL乙酸乙酯萃取一次之后再用20 mL乙酸乙酯萃取兩次，合并所有萃取液，在40℃條件旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干再溶于5 mL50％色譜甲醇中，經(jīng)0.45 μm有機(jī)濾頭過濾后HPLC測定。 (2)葡萄中單體酚的HPLC測定色譜柱：Hibar RT Lichrospher反相C1

5、8柱，250×4.0 mm，5 μm；流速：0.8 mL/min；柱溫：30℃。檢測波長：280 nm。梯度洗脫：流動相A：水：乙酸(98:2)；流動相B：乙腈。洗脫程序：0～10 min，B為16％；10～25 min，B為20％～40％；25～30 min，B為40％～0％。 2.葡萄酒中單體酚的分析測定方法 (1)樣品預(yù)處理方法選擇：本實(shí)驗(yàn)主要對液/液萃取(Liquid/liquid extraction，LLE)

6、、固相萃取柱萃取(Solid phase extration，SPE)二種前處理方法的最佳萃取參數(shù)、回收率和精確度進(jìn)行了研究。通過研究，得到了如下結(jié)論： 液/液萃取法萃取葡萄酒樣中單體酚時最佳參數(shù)為：酒樣溶液pH=2，乙酸乙酯用量為3×50 mL，萃取時間為10 min。通過該方法對葡萄酒進(jìn)行預(yù)處理后，利用HPLC測定，各個單體酚回收率在80.28％～91.69％之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.72％～3.69％。 固相萃取柱(

7、C18)法萃取葡萄酒樣中單體酚時最佳參數(shù)為：最佳pH為酒樣溶液的自然pH，最佳萃取溶劑0.1 mol/LHCL：甲醇1:4(v/v)，溶劑消耗量為15 mL，通過該方法對葡萄酒進(jìn)行預(yù)處理后，利用HPLC測定，各個單體酚回收率為23.37％～91.26％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.98％～2.82％。 通過對LLE和SPE預(yù)處理方法比較可知，固相萃取柱萃取法雖然精密度較液液萃取法要高一些，但是個別單體酚回收率相對較低，而且固相萃取柱萃取時

8、需使用固相萃取裝置和萃取柱(C18柱)，所以成本要比液液萃取高。液/液萃取法用于葡萄酒中10種單體酚分析測定，具有回收率較高，操作簡單，試驗(yàn)中無需貴重儀器等特點(diǎn)。 考慮到回收率，成本問題，本實(shí)驗(yàn)選擇液液萃取法為葡萄酒中單體酚分析檢測預(yù)處理方法。 (2)葡萄酒中單體酚的HPLC測定色譜柱：Hibar RT Lichrospher反相C18柱，250x4.0mm，5μm；流速：1.0 mL/min；柱溫；30℃。檢測波長：2