荷花粉和金針菇中巰基化合物的測(cè)定研究.pdf

1、本研究經(jīng)篩選研究的基礎(chǔ)上，主要對(duì)荷花粉和金針菇的樣品細(xì)胞內(nèi)的還原型谷胱甘肽（GSH）和含有半胱氨酸殘基的巰基化物的含量進(jìn)行檢測(cè)，意在篩選出富含GSH和巰基化合物的藥食兩用植物類樣品。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：人體內(nèi)含半胱氨酸殘基的巰基化合物含量的高低與人體的衰老和某些特殊的疾病有著密不可分的聯(lián)系。因此，通過篩選富含GSH及巰基化合物的藥食兼用的食品，對(duì)于人類的治病、防病、延年益壽具有實(shí)際意義。盡管，生物樣品中巰基化合物的測(cè)定有多種不同的方法，但是由于

2、這些方法采用不同的前處理過程，這導(dǎo)致了不同測(cè)定方法間存在較大的差異。本研究利用高效液相色譜法和光譜法對(duì)三種不同前處理方法得到的樣品提取液進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步前處理方法，測(cè)得的分析信號(hào)強(qiáng)度最大，盡可能地避免了前處理過程中細(xì)胞內(nèi)的（-SH）因胞外氧化環(huán)境導(dǎo)致的氧化變性，使得測(cè)定的結(jié)果更加實(shí)時(shí)、可靠地反映了生物細(xì)胞內(nèi)的含量。同時(shí)，本研究也采用了兩種不同測(cè)定方法分別對(duì)生物樣品中GSH和總巰基（-SH）的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)

3、果顯示，所測(cè)樣品中GSH和總巰基（-SH）的含量基本吻合，這充分說明了本研究所選擇的高效液相色譜法以及光譜法對(duì)所選生物樣品中巰基化合物檢測(cè)的可靠性。同時(shí)利用荷花粉作為活細(xì)胞樣本探討了不同重金屬離子脅迫時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的GSH和含巰基蛋白質(zhì)的應(yīng)答作用，為巰基化合物對(duì)重金屬解毒機(jī)制的研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用過量衍生化試劑DTNB的提取液，采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步前處理方法，對(duì)荷花粉中GSH和總巰基（-SH

4、）的含量進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定。測(cè)定結(jié)果顯示：荷花粉中 GSH和總巰基（-SH）的含量分別為2.0865μmol/g和9.5076μmol/g，但因荷花粉樣品中不含有類似于半胱氨酸（Cys）一樣的其他小分子巰基化合物，因此總巰基（-SH）和GSH含量的差值7.4211μmol/g，即為荷花粉中蛋白質(zhì)巰基（Prot-SH）的含量。方法的回收率為100.95％和99.91%，其檢測(cè)限分別為5.18μmol/L和6.22μmol/L。⑵采用衍生

5、化試劑5,5-二硫雙-2-硝基苯甲酸(DTNB)和鄰苯二甲醛（OPA）對(duì)荷花粉中總巰基（-SH）和GSH含量分別進(jìn)行了紫外光譜和熒光光譜的測(cè)定。荷花粉中 GSH的含量為1.8007μmol/g；總巰基（-SH）的含量為9.6829mol/g。光譜法測(cè)定的結(jié)果與HPLC法測(cè)定結(jié)果相比較，可以發(fā)現(xiàn)兩者結(jié)果相差不大，基本吻合?？梢宰C明兩種方法的可靠性。⑶采用高效液相色譜法測(cè)定不同重金屬浸泡下荷花粉中GSH和巰基蛋白質(zhì)（P-SH）的含量的變化，

6、以及采用ICP-MS法對(duì)不同重金屬浸泡后荷花粉中重金屬含量進(jìn)行測(cè)定。初步探討不同重金屬浸泡下胞內(nèi)巰基化合物的應(yīng)答機(jī)制，為生物細(xì)胞對(duì)重金屬解毒和積累機(jī)制的研究提供數(shù)據(jù)上的參考。⑷利用光譜法和高效液相色譜法分別對(duì)金針菇中GSH和總巰基（-SH）含量的進(jìn)行了測(cè)定，測(cè)定結(jié)果表明：HPLC法測(cè)得的金針菇中 GSH和總巰基的含量分別為1.3665μmol/g和1.6366μmol/g，光譜法測(cè)得的GSH和總巰基的含量分別為1.3429μmol/g和