應用固化酶檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留的速測技術(shù)研究.pdf

1、農(nóng)藥殘留的快速檢測技術(shù)對保護廣大消費者身體健康、避免急性食物中毒事件的發(fā)生，具有重要意義。本文針對以往農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)中存在的一些問題進行了比較深入的探討，在此基礎(chǔ)上開發(fā)出一套農(nóng)藥殘留快速檢測設(shè)備，并應用于實際蔬菜樣品的檢測。 首先，本文對以往大多數(shù)農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)中使用的快速提取方法進行了研究。在以前的方法中主要通過使用磷酸緩沖液或甲醇水溶液對蔬菜樣品進行簡單的表面漂洗，以實現(xiàn)對農(nóng)藥殘留的提取。作者通過向蔬菜表面添加不

2、同濃度的農(nóng)藥標準樣品，分別采用磷酸緩沖液和甲醇水溶液進行農(nóng)藥殘留的表面提取，并采用氣相色譜進行測定，最終確定了表面漂洗法對敵敵畏、甲胺磷、呋喃丹、樂果、抗蚜威、甲基對硫磷6種農(nóng)藥的提取效率。結(jié)果表明，表面漂洗法的提取效率受添加完畢后在室溫下放置時間長短的影響。當放置2h時，表面漂洗法對6種農(nóng)藥的提取效率可達到80％以上，但是當放置時間延長到4～5h以后，對6種農(nóng)藥的提取效率急劇下降，一般在20％～40％之間。作者經(jīng)過實驗研究，提出一種采

3、用微型組織搗碎機的快速提取方法，使用這種方法可使6種農(nóng)藥的提取效率達到70％以上。 其次，本文對乙酰膽堿酯酶的固定化技術(shù)進行了研究。采用交聯(lián)法對酶進行固定是一種廣泛采用的固定化方法，本文對影響固化乙酰膽堿酯酶活性的固定化條件，諸如pH值、BSA、GA、明膠的最佳使用濃度進行了實驗研究。經(jīng)交聯(lián)法固定的乙酰膽堿酯酶，在室溫下放置6個月以后酶活性仍可保持60％以上。但是采用交聯(lián)法對酶進行固定化過程中必須使用雙功能試劑戊二醛，此試劑本身

4、會對乙酰膽堿酯酶的活性造成較大傷害，所以經(jīng)固定化以后酶的活力回收率較低。目前，一種光交聯(lián)試劑聚乙烯醇苯乙烯吡啶(PVA-SbQ)在酶的固定化過程中倍受青睞，本文在實驗室合成出PVA-SbQ。經(jīng)PVA-SbQ固定后的乙酰膽堿酯酶具有較高的活性回收率，而且在室溫下放置6個月后，固化乙酰膽堿酯酶的活性仍可保持初始固化酶活性的70％以上。 第三，為了提高對農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果判斷的準確性，本研究采用酶標儀對檢測結(jié)果進行讀數(shù)測量，以代替目視觀

5、察結(jié)果的方法。酶標儀通常是針對酶聯(lián)免疫法測定黃曲霉素等毒素開發(fā)設(shè)計的，為將酶標儀應用到對農(nóng)藥殘留的快速檢測上，本文專門編寫了一套應用軟件，使酶標儀能實現(xiàn)對農(nóng)藥殘留的檢測。該軟件具有較好的人機交互界面，能夠自動提示檢測過程，計算并打印檢測結(jié)果，可與計算機連用進行數(shù)據(jù)的存儲及網(wǎng)絡(luò)傳輸。 第四，乙酰膽堿酯酶的來源問題一直是困擾農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)發(fā)展的一個重要因素。如果采用進口酶源不但價格較昂貴，而且到貨周期較長，難以滿足檢測過程的需

6、求。本文以胎牛血清為例對乙酰膽堿酯酶的分離純化進行了一定的探索。在對酶活性進行科學定義的基礎(chǔ)上，分別考察了AchE最適的pH范圍、溫度、底物濃度、反應時間等因素，最終確定出AchE的檢測方法，為酶的分離純化奠定了基礎(chǔ)。通過采用硫酸銨逐級沉淀、葡聚糖凝膠柱層析、DEAE纖維素柱層析三步分離純化過程，可得到單點純的乙酰膽堿酯酶，表現(xiàn)在凝膠電泳上即由硫酸銨沉淀液的4條譜帶減少至一條譜帶。 第五，將研制出的搗碎提取設(shè)備、固化乙酰膽堿酯酶