pm2.5致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷及白藜蘆醇的干預(yù)效應(yīng)研究

1、分類號(hào) 密 級(jí) UDC 保密期限 碩 士 學(xué) 位 論 文 碩 士 學(xué) 位 論 文 題 目 PM2.5 致 人 臍 靜 脈 內(nèi) 皮 細(xì) 胞 氧 化 損 傷 及 白 藜 蘆

2、 醇 的 干 預(yù) 效 應(yīng) 研 究 作者姓名 李利忠 指導(dǎo)教師 彭雙清 培養(yǎng)單位 中 國(guó) 人 民 解 放 軍 疾 病 預(yù) 防 控 制 所 專業(yè)名稱

3、 衛(wèi) 生 毒 理 學(xué) 論文提交日期 2016 年 06 月 13 日 學(xué)位授予單位 中 國(guó) 人 民 解 放 軍 軍 事 醫(yī) 學(xué) 科 學(xué) 院 答辯委員會(huì)主席 中 國(guó) 人 民 解 放 軍 軍 事 醫(yī) 學(xué)

4、科 學(xué) 院 制 中 國(guó) 人 民 解 放 軍 軍 事 醫(yī) 學(xué) 科 學(xué) 院 制 目 錄 縮略詞表 ........................................................................................................................ 1 中文摘要 .......................................

5、................................................................................. 3 英文摘要 ........................................................................................................................ 6 前

6、言 .......................................................................................................................... 10 第一部分：PM2.5 對(duì) HUVEC 細(xì)胞的氧化損傷研究 .............................................. 12 1 實(shí)驗(yàn)材料

7、.................................................................................................................. 12 2 實(shí)驗(yàn)方法 ............................................................................................

8、...................... 13 2.1 PM2.5 的采集 ................................................................................................ 13 2.2 PM2.5 的提取 ............................................................

9、.................................... 13 2.3 PM2.5 的配制與染毒方式 ............................................................................ 13 2.4 PM2.5 粒徑分析與電鏡觀察 .......................................................

10、.................. 14 2.5 細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng) ............................................................................................ 14 2.6 CCK-8 法測(cè)定細(xì)胞存活率 ..................................................................

11、.......... 14 2.7 細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量測(cè)定與熒光顯微鏡觀察 ................................ 15 2.8 細(xì)胞總 SOD 活性測(cè)定 .................................................................................. 15 2.9 細(xì)胞 GPx 活性測(cè)定 .................

12、..................................................................... 16 2.10 細(xì)胞內(nèi) MDA 含量測(cè)定 .............................................................................. 17 2.11 單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)測(cè)細(xì)胞拖尾率 .......................

13、................................... 17 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 .............................................................................................................. 19 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ................................................

14、.................................................................. 19 4.1 PM2.5 粒徑分布與微觀特征 ......................................................................... 19 4.2 PM2.5 對(duì) HUVEC 細(xì)胞存活率的影響 .......................

15、.................................. 21 4.3 PM2.5 對(duì) HUVEC 細(xì)胞內(nèi) ROS 水平的影響 ............................................... 22 4.4 PM2.5 對(duì) HUVEC 細(xì)胞 MDA 水平及 GPx 和 SOD 活力的影響 ............... 23 4.5 PM2.5 對(duì) HUVEC 細(xì)胞拖尾率的影響 ....

16、..................................................... 24 4.6 NAC 與 PM2.5 單獨(dú)或共同作用對(duì) HUVEC 細(xì)胞存活率、ROS 影響 ...... 26 5 討論 ....................................................................................................

17、...................... 27 6 小結(jié) .......................................................................................................................... 29 第二部分：白藜蘆醇干預(yù)對(duì) PM2.5 致 HUVEC 細(xì)胞氧化損傷的影響 ................. 30

18、 1 實(shí)驗(yàn)材料 .................................................................................................................. 30 1.1 細(xì)胞株 ...................................................................................

19、......................... 30 1.2 主要試劑及實(shí)驗(yàn)耗材 .................................................................................... 30 2 實(shí)驗(yàn)方法 ............................................................................

20、...................................... 30 2.1 CCK-8 法測(cè)定細(xì)胞存活率 ............................................................................ 30 2.2 細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量測(cè)定 ........................................................

21、........ 31 2.3 細(xì)胞內(nèi) MDA 含量測(cè)定 ................................................................................ 31 2.4 Western Blot 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞蛋白的提取 .............................................................. 32 2.5 Weste

22、rn Blot 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞核蛋白的提取 .......................................................... 32 2.6 Western Blot 實(shí)驗(yàn)蛋白的定量與變性 .......................................................... 32 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 .....................................

23、......................................................................... 36 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 .................................................................................................................. 36 4.1 RSV 對(duì) HUV