食用菌制種技術(shù)

1、第五章　食用菌,第一節(jié)：制種技術(shù),教學(xué)目標(biāo)、重點、難點,教學(xué)目的：熟練使用制種用品、用具、設(shè)備、設(shè)施進行制種生產(chǎn)。本節(jié)重點：食用菌制種條件，制種工具的使用。,一、　食用菌菌種的概念與級別,(一)、菌種的概念　菌種是指經(jīng)人工培養(yǎng)并可供進一步繁殖或栽培使用的食用菌菌絲體，常常包括供菌絲體生長的基質(zhì)在內(nèi)，共同組成繁殖材料。菌種是食用菌生產(chǎn)的首要條件，菌種性狀的優(yōu)劣直接影響到生產(chǎn)的成敗。常言道：“有收無收在于種（種子），多收少收在于種（

2、栽培）”,（二）菌種的級別,1.一級種（母種）,2.二級種（原種）,3.三級種（栽培種）,不可再擴,母種、原種和栽培種,二、制種常用的設(shè)備與用品,（一）、滅菌設(shè)備1、手提式高壓滅菌鍋,使用壓力：1.5kg/c㎡滅菌時間：25—30min對象：玻璃器皿、母種培養(yǎng)基、無菌水等?？捎酶邏猴堝佁娲?，但滅菌時間延長至40min,2、臥式高壓滅菌鍋,使用壓力：1.5kg/c㎡滅菌時間：1.5—2h對象：原種、栽培種培養(yǎng)基的滅菌使用方

3、便，但造價高，一般菇農(nóng)用常壓滅菌灶。,3、常壓滅菌灶,使用溫度：100---105℃滅菌時間：維持8—10h對象：原種、栽培種培養(yǎng)基的滅菌,（二）、制種容器,（三）、接種設(shè)備與工具,1、接種設(shè)備（1）、超凈工作臺（局部凈化設(shè)備空，氣過濾除菌）,（2）、接種箱,2、接種工具,接種針、接種環(huán)、接種刀、接種鏟、鑷子等,（四）、 菌種培養(yǎng)設(shè)備,放置接種后各級菌種，并提供適宜溫度和通氣條件，使菌絲生長良好的專用設(shè)備,1、恒溫培養(yǎng)箱,根據(jù)需

4、要使溫度恒定在一定范圍內(nèi),一般用于培養(yǎng)斜面試管和少部分原種。,,,2、培養(yǎng)室,培養(yǎng)架：以操作方便為宜,寬0.7~1.2米，層間40cm調(diào)溫：電爐、紅外線、暖氣管、門窗、抽風(fēng)機測溫：干濕球溫度計 照明：避免使用藍光 滅菌：紫外燈,,,三、菌種的制作,(一)母種的制作1、母種培養(yǎng)基,①PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，水1000亳升，PH值自然。適合以一般母種的培養(yǎng),②. PDA加富培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯

5、200克，麥麩100克，葡萄糖20克，瓊脂20克，水1000亳升，PH值自然。適合母種的復(fù)壯培養(yǎng)。③. PDA綜合培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，維生素B15—10mg，水1000亳升，PH值自然。適合草菇、靈芝、猴頭菇、茯苓母種的培養(yǎng)。④ . 母種保藏培養(yǎng)基：在PDA培養(yǎng)基中加10g蛋白胨。,,粉狀,條狀,2、 母種培養(yǎng)基的制備,PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g、蔗糖20g、

6、瓊脂15-20g、水1000ml,馬鈴薯去皮，切片，稱取200克，沸水煮20-30分鐘，過濾，取濾汁添水至1000ml，加葡萄糖或蔗糖20克、瓊脂15-20克煮熔，pH自然，常規(guī)滅菌即可。,準(zhǔn)備工作,,,,稱量、材料預(yù)處理　　按配方準(zhǔn)確稱量各營養(yǎng)物質(zhì)。將馬鈴薯去皮、挖掉芽眼后稱量200g，切成1cm見方的小塊。瓊脂剪碎后用水浸泡。,熬煮　　將切好的馬鈴薯塊加適量水后放入電飯鍋中，煮至酥而不爛。,過濾、加可溶藥物　 用雙層沙

7、布過濾，取濾汁，放在電飯鍋中加 入糖,熬瓊脂、定容 　　 在沸騰狀態(tài)下加入瓊脂，直到瓊脂完全溶化為止，定容至1000ml。,,母種培養(yǎng)基制作流程1. 分裝試管 2. 塞棉塞 3. 打捆 4. 滅菌 5. 擺斜面,（1）、裝管：18 mm×180 mm或20 mm×200 mm的玻璃試管，分裝量掌握在試管長度的1/4-1/5，原則上是擺放成斜面后，斜面的長度為試管長度的1/2-2/3。（2）、滅菌：母種

8、培養(yǎng)基滅菌時，需用1.05~1.1 kg/cm2的壓強，溫度為121℃，滅菌（保持121℃）30 min。（3）、斜面的擺置：趁熱擺好斜面,擺斜面　　滅菌結(jié)束后鍋蓋開1/5的小縫，用余熱烘干報紙和棉塞，然后擺斜面。斜面長是試管總長的1/2,3、種菇的組織分離,（1）種菇的選擇：外觀典型、大小適中、無任何污染、7--8成熟、第1~2茬的子實體。（2）接種箱與分離工具的消毒接種箱：科達氣霧消毒粉2—3g或高錳酸鉀5g，甲醛10m

9、l混合氣霧消毒30min.分離工具的消毒：用70--75﹪酒精擦拭后，再在酒精燈上反復(fù)灼燒。,（3）種菇的解剖分離,縱剖（撕）菇體尖頭鑷取柄蓋交界處綠豆粒大的組織放入新斜面中部,金針菇是橫切菌蓋上薄的菌肉或取未開傘的幼嫩子實體的菌褶片,靈芝組織分離所取的部位是菌蓋邊緣的白色生長圈,木耳等膠質(zhì)菌類的菌肉薄，子實體經(jīng)無菌水反復(fù)沖洗后，撕開子實體或用刀片將兩層耳片切開，挑取一小塊菌肉組織即可。,（4）種菇分離后的觀察培養(yǎng)

10、將分離好的試管放入23--25℃的溫箱中培養(yǎng)，24—36h后開始萌發(fā)菌絲，2—3d后形成菌落，此時注意淘汰雜菌污染或菌絲生長希弱的試管，10d左右菌絲可長滿試管，放入冰箱中儲存。 選擇適宜的季節(jié)做出菇試驗。,4、母種的轉(zhuǎn)管培養(yǎng),母種的接種必須在嚴(yán)格的無菌條件下進行。否則將會造成嚴(yán)重污染，給生產(chǎn)造成造成巨大損失。然后將所有試管及接種器具放入接種箱里進行消毒滅菌，力求滅菌徹底。在點燃酒精燈火焰上進行操作，將菌種試管和接種用

11、斜面培養(yǎng)基放在火焰旁。撥去棉塞，把消毒滅菌的接種針伸入菌種試管內(nèi)，挑小塊菌種放入斜面培養(yǎng)基中，一支母種可移栽30—40支試管。原始母種可轉(zhuǎn)管2—4代。,圖3-14斜面試管轉(zhuǎn)管接種,培養(yǎng)：將移接好的試管放入20--25℃的溫箱中培養(yǎng)，同時注意反復(fù)觀察，清雜去劣，經(jīng)10d左右菌絲可長滿試管。,（二）原種的制作,1、原種培養(yǎng)基配方與配制,① 木屑培養(yǎng)基：木屑78%，麩皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水適量。適用于培養(yǎng)平菇、木耳、香菇

12、、猴頭。② 棉子殼培養(yǎng)基：棉子殼78%，麩皮或谷粒20%，石膏1%，磷肥1%，水適量。水適量。適用于培養(yǎng)平菇、猴頭、金針菇、雞腿菇。,③谷粒配方：稻谷98%，石膏粉2%④棉子殼谷粒配方：棉子殼50%，谷粒,49%，石膏粉1%,培養(yǎng)料的配制,⑴ 木屑、棉籽殼培養(yǎng)料的拌料配制 木屑、棉籽殼培養(yǎng)料按配方稱量后，堆制混和，加水拌料，配方中的糖也可先溶于水中再拌入。拌料時要控制料的含水量在60﹪左右 。,⑵ 谷粒培養(yǎng)料的配制

13、 谷粒因其營養(yǎng)較豐富，制作的菌種具有菌絲萌發(fā)早、吃料快、抗衰老能力強、產(chǎn)量高等優(yōu)點，在生產(chǎn)中應(yīng)用較多。一般是采用浸泡法或煮熟法，也可用石灰水浸泡。注：煮熟至將開口為度,2、裝瓶 滅菌 將培養(yǎng)料拌勻裝入菌種瓶（或袋）內(nèi)、裝料松緊適宜，上下一致，裝料高度以齊瓶（袋）肩為宜。然后用手指在瓶的中央向下大一個小洞，以利接種定植，塞上棉塞。裝好的料瓶（袋）要當(dāng)天滅菌，以免培養(yǎng)料發(fā)霉變質(zhì)。,培養(yǎng)基的滅菌 通常

14、采用高壓蒸氣滅菌法和常壓蒸氣滅菌法以達到滅菌的目的。高壓滅菌2小時或常壓滅菌于100℃維持8-10小時，滅菌后培養(yǎng)基最好放在適溫下，空白培養(yǎng)5-7天，以檢查培養(yǎng)基滅菌的效果。如在此期間沒有出現(xiàn)任何雜菌，說明滅菌效果良好。待其冷卻30℃以下可接種。也可高壓滅菌（1.5—2h),3、原種的接種,4、原種的培養(yǎng),培養(yǎng)室的大小和床架數(shù)量應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模來定?！∽⒁猓哼m溫培養(yǎng)，對多數(shù)食用菌而言，可保 持20~25℃，定期檢查雜菌。時間25—40天

15、 。正常菌絲：潔白、粗壯。雜菌：有黃、綠、黑橘紅等多種顏色，且生長速度快，稀疏無力。,（三）、栽培種的制作,基本上同原種，可參照執(zhí)行。容器可用15cm30cm0.005cm聚丙烯朔料袋加套環(huán)替代。,接栽培種,用接種匙（鑷、鏟）取棗大原種放于袋的兩端或瓶中料面上,,返回本節(jié),四、菌種的保藏,（一）菌種的保藏的原理及設(shè)備1、菌種的保藏的原理：采用干燥、低溫、隔氧等方法，盡可能地降低菌種的代謝活動，并保證原種的純度。2、菌種的