杉木木材形成相關(guān)擴(kuò)展蛋白基因組織定位研究.pdf

1、本研究在課題組已有的杉木分子木材形成的分子生物學(xué)研究基礎(chǔ)上，利用RNA原位雜交技術(shù)對(duì)擴(kuò)展蛋白基因ClEXP2在莖段組織中的表達(dá)進(jìn)行了空間定位。主要結(jié)果如下：
　　 1.用杉木基因型020的當(dāng)年生莖段為實(shí)驗(yàn)材料，制作石蠟切片。結(jié)果顯示組織切片清晰完整。
　　 2.本研究中，用NBT/NCIP顯色法對(duì)石蠟組織切片中內(nèi)源性堿性磷酸酶進(jìn)行檢測(cè)顯示，被檢組織具有高豐度的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，且集中分布于髓、韌皮部和皮層中。這說明在本實(shí)驗(yàn)的活

2、體組織切片中內(nèi)源性的堿性磷酸酶具有活性，必須在原位雜交實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行內(nèi)源性堿性磷酸酶的封阻。
　　 3.通過設(shè)計(jì)5’端加有酶切位點(diǎn)的特異引物擴(kuò)增得到CLEXP2基因的280bp特異序列，構(gòu)建至含有T7啟動(dòng)子的T載體，經(jīng)線性化處理陽性克隆質(zhì)粒，并以此為模板，合成了帶有地高辛標(biāo)記的CLEXP2基因mRNA反義探針。
　　 4.在用CLEXP2基因mRNA反義探針進(jìn)行反復(fù)的原位雜交實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，僅在實(shí)驗(yàn)組中檢測(cè)到反義探針?biāo)哂械碾s交