外周血細(xì)胞膜上cd55和cd59缺陷對(duì)鑒別診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿與貧血的意義

1、<p>　　外周血細(xì)胞膜上CD55和CD59缺陷對(duì)鑒別診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿與貧血的意義</p><p>　　作者：阮月芹 韓兆東 李彩玉 陳佳榮 周玉明 孔祥華 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 ,,陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿；,貧血；,流式細(xì)胞術(shù)；,CD55；,CD59；,鑒別診斷 </p><p>　　【摘要】 目的 探討患者外周血細(xì)胞膜上CD

2、55和CD59缺陷對(duì)鑒別診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（parosysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH）與貧血（anemia）的意義。方法 采用熒光素標(biāo)記的CD55和CD59單克隆抗體，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)30例正常人、32例再生障礙性貧血（AA）、28例陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）或AAPNH綜合征、38例小細(xì)胞低色素性貧血（IDA）、24例巨幼細(xì)胞性貧血（MA）、12例自身免疫溶血性貧血（AIHA）患者外

3、周血中紅細(xì)胞及中性粒細(xì)胞CD55-和CD59-的百分率。結(jié)果 CD55-、CD59-正常人紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的百分率均＜5%；PNH或AAPNH患者均＞20%；部分再障患者＞5%（均＜15%）。約有40%的小細(xì)胞低色素貧血患者CD55-、CD59-紅細(xì)胞＞5%（均＜20%）；但中性粒細(xì)胞CD55-、CD59-百分率均＜5%。巨幼貧、自身免疫溶血性盆血患者的CD55-、CD59-紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均＜5%。結(jié)論 利用流式細(xì)胞術(shù)同時(shí)檢測(cè)

4、患者外周血中紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞膜上CD55和CD59缺陷是臨床鑒別診斷PN</p><p>　　【關(guān)鍵詞】 陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿；貧血；流式細(xì)胞術(shù)；CD55；CD59；鑒別診斷 </p><p>　　【Abstract】 Objective To evaluate the significance of deficiency of CD55/CD59 on peripheral b

5、lood cells in differentiation and diagnosis of PNH and anemia.Methods CD55/CD59monoclonal antibodies labeled by fluorescence were used to analyze percentage of CD55/CD59 on erythrocyte and neutrophil in 30 normal subjec

6、ts,32 cases of AA，28 cases of PNH or AAPNH,38 cases of IDA,24 cases of MA and 12 cases of AIHA patients with flow cytometry.Results The percentage of CD55/CD59 on erythrocyte and neutro</p><p>　　【 Key words

7、】 paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,anemia,flow cytometry,CD55,CD59,differentiation </p><p>　　陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）是造血干細(xì)胞基因突變的克隆性疾病，其異常血細(xì)胞膜上糖基磷脂酰肌醇（GPI）生成障礙，導(dǎo)致患者血細(xì)胞膜上GPI錨定的表面分子CD55、CD59表達(dá)明顯減低或缺乏，因而對(duì)正常血清中的補(bǔ)

8、體特別敏感而發(fā)生溶血。以往對(duì)PNH的實(shí)驗(yàn)室診斷主要依賴酸溶血實(shí)驗(yàn)，此方法僅限于測(cè)定紅細(xì)胞對(duì)補(bǔ)體的敏感度，只有患者外周血受累細(xì)胞膜上CD55、CD59缺陷達(dá)一定比例時(shí)才有可能陽(yáng)性，故其敏感性受限，使部分PNH患者難以確診。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞CD55、CD59是目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室用來(lái)作為診斷陣發(fā)性血紅蛋白尿（PNH）的首選實(shí)驗(yàn)［1］。我院采用熒光素標(biāo)記的CD55和CD59單克隆抗體，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)30例正常人、32例再生障

9、礙性貧血（AA）、28例PNH或AAPNH綜合征、38例小細(xì)胞低色素性貧血（IDA）、24例巨幼細(xì)胞性貧血（MA），12例自身免疫溶血性貧血（AIHA），患者外周血紅細(xì)胞及中性粒細(xì)胞CD55-和CD59-的百分率，其結(jié)果明顯不同?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。 </p><p><b>　　1 材料與方法 </b></p><p><b>　　11 材料 </

10、b></p><p>　　111 標(biāo)本來(lái)源：30例健康體檢者作為正常對(duì)照組，均排除血液病。其中男17例，女13例，平均年齡26歲；為門診體檢合格者；PNH組13例，其中男7例，女6例，平均年齡36例；AAPNH組15例，其中男9例，女6例，平均年齡33歲；AA組32例，其中男18例，女14例，平均年齡32歲；IDA組38例，其中男20例，女18例，平均年齡35歲；MA組24例，其中男10例，女14例，平均

11、年齡35歲；AIHA組12例，其中男7例，女5例，平均年齡29歲。所有患者均為我院門診及住院病人，均符合血液病的診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。 </p><p>　　112 標(biāo)本采集：抽取肘靜脈血2 ml置于EDTAk2抗凝管中，輕輕混勻待用。 </p><p>　　113 試劑：CD55FITC和CD59PE熒光單克隆抗體及紅細(xì)胞裂解液ImmunoprepTM試劑，IsotonⅢ稀釋液（PBS）均

12、購(gòu)自法國(guó)Immunotech公司。 </p><p>　　114 儀器：美國(guó)BeckmanCoulter公司產(chǎn)FC500型流式細(xì)胞儀及Coulter QPREP溶血制備儀。 </p><p><b>　　12 方法 </b></p><p>　　121 紅細(xì)胞標(biāo)記及檢測(cè)：①每個(gè)待測(cè)標(biāo)本均取5 μl EDTAk2抗凝外周血加至含995 μl

13、 PBS的試管中輕輕混勻（200倍稀釋）；②對(duì)照管：取20 μl正常人紅細(xì)胞懸液于流式專用試管中，分別加入20 μl CD55和CD59熒光單克隆抗體；樣品管：取20 μl患者紅細(xì)胞懸液于流式專用試管中，分別加入20 μl CD55和CD59熒光單克隆抗體。③混勻，室溫避光15 min后加PBS 1 ml，上機(jī)檢測(cè)。 </p><p>　　122 中性粒細(xì)胞標(biāo)記及檢測(cè)：①分別取100 μl抗凝全血于流式專用試

14、管中用ImmunoprepTM試劑溶血，離心10 min（500 r/min）棄上清，用PBS洗3次，加PBS調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/μl。②對(duì)照管：取100 μl正常人中性粒細(xì)胞懸液于流式專用試管中，分別加入20 μl CD55或CD59熒光單克隆抗體；樣品管：取100 μl患者中性粒細(xì)胞懸液于流式專用試管中，分別加入20 μl CD55或CD59熒光單克隆抗體。③混勻，室溫避光15 min后加PBS 1 ml，上機(jī)檢測(cè)。

15、 </p><p><b>　　2 結(jié)果 </b></p><p>　　正常對(duì)照組、PNH、AAPNH及IDA、MA、AA、AIHA各組細(xì)胞CD55、CD59缺陷結(jié)果見表1。 </p><p>　　表1 各組紅細(xì)胞及中性粒細(xì)胞CD55、CD59檢測(cè)結(jié)果（略） </p><p><b>　　3 討論 <

16、;/b></p><p>　　近年來(lái)的研究已證明補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD55和CD59細(xì)胞膜上缺失是PNH發(fā)病的關(guān)鍵［3］。由于GPI的合成發(fā)生在造血干細(xì)胞水平，所以，在外周血的三系細(xì)胞膜上都有CD55和CD59的表達(dá)異常。但只有紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的CD55和CD59表達(dá)更具有特異性和敏感性，且易于檢測(cè)［4］。我們的檢測(cè)結(jié)果表明，30例正常人及24例巨幼細(xì)胞性貧血、12例自身免疫溶血性貧血（AIHA）患者外周血紅細(xì)

17、胞和中性粒細(xì)胞CD55-和CD59-的百分率均＜5%；13例PNH和15例AAPNH綜合征CD55-和CD59-的百分率均＞5%；32例再生障礙性貧血患者中有8例CD55-和CD59-的百分率＞5%，但均＜15%；說(shuō)明部分再障病人的紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中也有PNH樣陰性細(xì)胞存在，只是程度較PNH病人輕。提示再障病人也有克隆異常性造血，與呂照紅等［5］報(bào)道一致。38例小細(xì)胞性貧血患者有15例紅細(xì)胞CD55-和CD59-的百分率＞5%，均＜2

18、0%；但中性粒細(xì)胞CD55-和CD59-的百分率均＜5%。至于為何小細(xì)胞低色素性貧血患者紅細(xì)胞會(huì)有PNH樣陰性細(xì)胞出現(xiàn)而粒細(xì)胞正常的原因不清楚。由于缺鐵是造成小細(xì)胞低色素性貧血的主</p><p><b>　　參考文獻(xiàn) </b></p><p>　　1Pilar MH,MA,Julia Almeida,et al.Comparative analysis of dif

19、ferent flow cytometrybased Immunophenotypic methods for the analysis of CD59 and CD55 expression on major peression on major blood cell subsets［J］.Clin Cytometry,2002,50:191201 </p><p>　　2張志南.血液病診斷劑療效標(biāo)準(zhǔn)［M］.第

20、2版.北京：北京科學(xué)出版社，1998.8896 </p><p>　　3Norris J,Hall S,Ware RE,et al.Gycosylphosphatidy linositol anchor synthesis in parosysmal nocturnal hemoglobinuria:partial or complete defect in an early step［J］.Blood,1994

21、,83:816820 </p><p>　　4徐從高，張銻，趙睿，等.補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白在三種干細(xì)胞缺陷性貧血中的表達(dá)及其意義的研究［J］.中華血液學(xué)雜志，1999，20（10）：511514 </p><p>　　5呂照江，張之南，李達(dá)，等.從再生障礙貧血患者檢出陣發(fā)性血紅蛋白尿癥異常細(xì)胞的觀察［J］.中華血液學(xué)雜志，1997，18（10）：521524 </p><p&g