拮抗香蕉枯萎病木霉菌株的分離、篩選及應(yīng)用.pdf

1、香蕉枯萎病是由尖孢鐮刀菌古巴專化型引起的一種毀滅性病害,目前尚缺乏有效的防治方法。木霉菌是重要的植物病害生物防治菌,廣泛分布于自然界,具有廣泛的適應(yīng)性,能殺傷多種重要的植物病原菌且作用機(jī)制多種多樣。筆者共采集土樣206份,用改良的馬丁氏孟加拉紅培養(yǎng)基分離木霉344株,通過(guò)與尖孢鐮刀菌FOC4-B2菌株的對(duì)峙培養(yǎng),對(duì)木霉菌進(jìn)行了體外拮抗作用測(cè)定及評(píng)價(jià),篩選出拮抗效果較好的木霉96株,再與鐮刀菌不同?；妥鲛卓箤?shí)驗(yàn),結(jié)果選出10株廣譜抗菌的

2、木霉菌株;通過(guò)木霉不同菌株對(duì)香蕉根際分泌物親和能力比較研究,篩選出木霉T-C2與香蕉根際分泌物親和能力比較強(qiáng)。
　　 測(cè)無(wú)菌土中木霉T-C2與病原菌FOC4-B2的種群動(dòng)態(tài)變化,確定木霉T-C2在無(wú)菌土中有比較強(qiáng)的定植能力并對(duì)病原菌FOC4-B2有拮抗效果;杯苗試驗(yàn)中,對(duì)照發(fā)病率達(dá)100％,說(shuō)明病原菌FOC4-B2致病性很強(qiáng),用木霉T-C2預(yù)處理后的杯苗發(fā)病率可以抑制在10％;用木霉做小區(qū)試驗(yàn),T-C2、T-H3、T-H6、T-

3、H8、T-H11、T-H12、T-R2和T-W11防病指數(shù)都達(dá)到60％以上,用木霉T-C2提前處理土壤,防病指數(shù)可達(dá)90％以上;田間試驗(yàn),木霉的防病率可達(dá)30％以上。
　　 木霉菌T-C2發(fā)酵條件的優(yōu)化中,對(duì)液體發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源、氮源、碳氮比、pH值、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、固體發(fā)酵培養(yǎng)基的含水量等因素進(jìn)行了試驗(yàn)。葡萄糖與蔗糖是比較理想的外加碳源:牛肉浸膏是比較理想的外加氮源,產(chǎn)孢量達(dá)4.0×109cfu/ml;碳氮比在15:1至

4、20:1間比較理想,產(chǎn)孢量達(dá)4.8×109cfu/ml;pH值6、6.5、7.0適合木霉產(chǎn)孢,產(chǎn)孢量高達(dá)2.5×109cfu/ml,隨著pH值變化產(chǎn)孢量也在變化;15℃、20℃溫度太低,木霉菌生長(zhǎng)緩慢,25℃、28℃是木霉比較適合的溫度生長(zhǎng)良好,產(chǎn)孢量達(dá)5×109cfu/ml,30℃、35℃培養(yǎng)溫度偏高,35℃下培養(yǎng)的木霉菌絲過(guò)早發(fā)黃;木霉發(fā)酵培養(yǎng)時(shí),第3d開(kāi)始出現(xiàn)綠色的孢子,6d孢子綠色很深,第8d菌株生長(zhǎng)繁殖速度開(kāi)始下滑,10d生長(zhǎng)

5、速度下降,說(shuō)明培養(yǎng)基養(yǎng)料已經(jīng)耗盡,因此發(fā)酵適宜周期為8d。
　　 優(yōu)化條件下培養(yǎng)種子液達(dá)109cfu/ml,固體發(fā)酵培養(yǎng)基15％至20％接種量平均產(chǎn)孢量最高,可達(dá)6.0-8.0×109cfu/ml;固體發(fā)酵培養(yǎng)基接種量按15％,培養(yǎng)基含水量40％進(jìn)行接種,產(chǎn)孢量較大,可達(dá)8.0×109cfu/ml。
　　 木霉發(fā)酵對(duì)木霉菌的生防機(jī)理研究表明,木霉菌對(duì)香蕉枯萎病鐮刀菌有競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用、寄生作用和抗生作用。木霉菌對(duì)香蕉枯萎病

6、鐮刀菌有很強(qiáng)的寄生作用和空間競(jìng)爭(zhēng)作用,對(duì)木霉菌代謝活性物質(zhì)的研究表明木霉菌發(fā)酵液活性物質(zhì)在常溫下較耐貯藏,放置15d后仍保持較強(qiáng)的抑菌活性,木霉代謝產(chǎn)物的活性物質(zhì)在常溫下不易破壞,但是不耐高溫;FOC4-B2發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)木霉有輕微的抑制作用,涂有FOC4-B2發(fā)酵產(chǎn)物的地方木霉菌絲發(fā)黃但可以生長(zhǎng),而涂有木霉發(fā)酵液的平板病原菌生長(zhǎng)緩慢;木霉菌株揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對(duì)病原菌有一定的抑制作用,但是所有木霉菌株的抑菌率都低于50％,比難揮發(fā)代謝產(chǎn)物的抑