一株黃瓜枯萎病拮抗細(xì)菌的分離鑒定及其相關(guān)特性的研究.pdf

1、黃瓜枯萎病是一種對黃瓜種植生產(chǎn)有著嚴(yán)重影響的土傳病害，在瓜類等蔬菜種植地多有發(fā)生，其病原菌為尖孢鐮刀菌。傳統(tǒng)的防治方法是施用化學(xué)農(nóng)藥，但藥物殘留、耐藥性等多種副作用對食品安全、環(huán)境構(gòu)成了巨大威脅。生物防治方法因為作用明顯、對環(huán)境相對安全，有利于農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和生態(tài)環(huán)境的改善而受到人們的重視。
　　 從采自山東、云南、陜西等地的蔬菜大棚土壤中分離篩選出一株對黃瓜枯萎病有明顯抑制作用的拮抗細(xì)菌YHJ15，經(jīng)過形態(tài)觀察、生理生化特征

2、分析和16S rDNA序列測定，將其初步鑒定為短小芽孢桿菌。該菌適于生長于pH5-7中性偏酸的環(huán)境，對氧氣的需求量比較大，適于生長的NaCl濃度比較寬。其生長最適宜的碳源和氮源分別是半乳糖和牛肉膏。對抗生素的敏感性較高，尤其對林可霉素比較敏感。在15-35℃范圍內(nèi)，生長速度沒有明顯差異。另外，YHJ15能夠產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶等。
　　 通過對峙實驗，YHJ15的發(fā)酵液表現(xiàn)出對黃瓜枯萎病病原菌的明顯抑制效果，而且發(fā)酵液經(jīng)過121℃，30

3、min高壓滅菌后，抑制效果下降不明顯。YHJ15的揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對病原菌有一定的抑制效果，但是相對抑菌率僅有25.5％；非揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對病原菌菌絲抑制效果則較高，相對抑菌率可達(dá)48.9％。發(fā)酵液對黃瓜種子的發(fā)芽率未表現(xiàn)出抑制作用。發(fā)酵液拮抗活性的優(yōu)化試驗結(jié)果表明，最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為大豆蛋白胨，最佳pH為7-8，最佳接種量為2.5％，30mL/250mL為最佳裝液量，35h范圍為最適培養(yǎng)時間，25-35℃為最佳溫度范圍。

4、>　　 本文還對YHJ15的拮抗物質(zhì)的理化性質(zhì)做了初步探索。發(fā)酵液經(jīng)70％硫酸銨沉淀所獲得的粗提物的拮抗效果最好，拮抗物質(zhì)能夠經(jīng)過50-100℃、30min處理后，拮抗活性有所下降。拮抗物質(zhì)對酸性環(huán)境比較穩(wěn)定，但對堿性環(huán)境比較敏感，表現(xiàn)在pH5-8時抑菌活性較高，在pH超過12時拮抗物質(zhì)幾乎沒有抑菌活性。經(jīng)過蛋白酶處理后，拮抗物質(zhì)均有一定程度的活性下降，下降幅度均超過了50％。拮抗物質(zhì)對紫外線有一定敏感性，但下降幅度與紫外線強(qiáng)度、輻射

5、時間無嚴(yán)格正相關(guān)關(guān)系。拮抗物質(zhì)對氯仿不敏感。經(jīng)過常溫和4℃放置處理，拮抗物質(zhì)的相對抑菌率會隨時間延長而降低，常溫放置時，第14d即可有沉淀析出，第2個月時相對抑菌率已經(jīng)下降至34.27％，第6個月時已經(jīng)無法檢出抑菌活性。而在4℃放置時，在到第4個月時拮抗活性才有明顯降低。拮抗物質(zhì)對于0.2mol/L-1.0mol/L濃度范圍的NaCl不敏感。另外拮抗物質(zhì)的粗提液的活性經(jīng)高壓滅菌后顯著下降，相對抑菌率下降至37.29％，說明拮抗物質(zhì)中有一