東亞飛蝗海藻糖酶基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、海藻糖是一種由兩個(gè)葡萄糖分子組成的非還原性二糖,廣泛存在于各種生物中,包括細(xì)菌、真菌、植物及已知所有種類的昆蟲(chóng)中,是昆蟲(chóng)血淋巴中主要的糖類(大約占80％~90%)和能量物質(zhì)。海藻糖既是一種貯藏性糖類,又是應(yīng)激代謝的重要產(chǎn)物,在干旱、脫水特別是冷凍、高溫和氧化等不良條件下,對(duì)生物大分子有很好的保護(hù)作用。海藻糖酶可以特異性地將一分子海藻糖水解為兩分子葡萄糖而被利用,鑒于海藻糖酶在生物有機(jī)體能量代謝過(guò)程中的重要作用,近年來(lái)許多生物化學(xué)家致力于

2、研發(fā)基于海藻糖酶抑制劑的新型農(nóng)藥,試圖通過(guò)阻斷有機(jī)體內(nèi)海藻糖的水解,來(lái)達(dá)到殺蟲(chóng)和抑菌的目的。海藻糖酶是海藻糖分解代謝過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵酶。雖然有關(guān)昆蟲(chóng)海藻糖酶基因的研究已經(jīng)比較多,大量編碼海藻糖酶的cDNA序列也得到了克隆,但是東亞飛蝗作為一種世界性的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng),目前尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道。本研究采用RT-PCR和RACE方法從東亞飛蝗(Locusta migratoria manilensi)中克隆了一個(gè)可溶性海藻糖酶基因(縮寫(xiě)名為L(zhǎng)mTre)

3、的全長(zhǎng)cDNA序列(GenBank登錄號(hào):FJ795020),并分析了該基因在不同組織的表達(dá)特征。獲得的cDNA全長(zhǎng)1953bp,其中包括1686bp的開(kāi)放閱讀框,共編碼561個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)的分子量和等電點(diǎn)分別為65579.82 Daltons和6.66,信號(hào)肽和跨膜分析顯示此蛋白屬于可溶性蛋白。該氨基酸序列和已經(jīng)公布的其他昆蟲(chóng)的海藻糖酶氨基酸序列有較高的相似性(41～48%)。本研究通過(guò)半定量RT-PCR研究了LmTre的組織表達(dá)情況