中國(guó)荷斯坦奶牛hsp70基因和chip基因多態(tài)性對(duì)熱應(yīng)激影響研究.pdf

1、奶牛熱應(yīng)激一直影響著奶牛業(yè)的發(fā)展.給奶牛業(yè)造成嚴(yán)重?fù)p失。HSP70作為分子伴侶在正常和應(yīng)激條件下對(duì)機(jī)體的生理機(jī)能發(fā)揮重要作用，CHIP具有E3泛素鏈接酶活性，與分子伴侶HSP70相互作用在泛素蛋白酶降解系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。本試驗(yàn)選擇了中國(guó)荷斯坦牛為試驗(yàn)材料，以hsp70基因和chip基因作為功能候選基因進(jìn)行研究，通過(guò)單核苷酸多態(tài)性和統(tǒng)計(jì)模型分析，以期為中國(guó)荷斯坦牛育種提供分子標(biāo)記輔助選擇的依據(jù)。試驗(yàn)采集427頭系譜資料齊全、生產(chǎn)記錄完整

2、的中國(guó)荷斯坦牛血樣，并采集兩頭身體健康的荷斯坦奶牛的組織，包括心臟，肌肉，肝臟，脾臟和腎臟。利用PCR-SSCP，PCR-RFLP，CRS-RFLP技術(shù)對(duì)HSP70基因和CHIP基因的多態(tài)性進(jìn)行研究，利用FQ-PCR技術(shù)檢測(cè)chip和hsp70基因在不同組織中的mRNA表達(dá)水平。
　　 對(duì)hsp70基因外顯子部分序列進(jìn)行擴(kuò)增，測(cè)序結(jié)果表明:在1524位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)G/A突變，但未導(dǎo)致所編碼的氨基酸序列發(fā)生改變。PCR-RELP結(jié)果發(fā)現(xiàn)

3、AA，AB兩種基因型，A等位基因占主要優(yōu)勢(shì)，屬于低度多態(tài)，不是理想的分子標(biāo)記。群體遺傳學(xué)分析表明，該位點(diǎn)達(dá)到Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P＞0.05）。擴(kuò)增chip全基因序列，在719位點(diǎn)第一內(nèi)含子上發(fā)現(xiàn)C/T突變，在1014位點(diǎn)第二內(nèi)含子上發(fā)現(xiàn)T缺失，1407位點(diǎn)第四外顯子上發(fā)現(xiàn)T插入并引起所編碼的氨基酸179位置移碼突變。1014位點(diǎn)T缺失無(wú)酶切位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。PCR-RELP，CRS-RFLP結(jié)果發(fā)現(xiàn)719，1407兩個(gè)位

4、點(diǎn)均存在三種基因型，A、B兩種等位基因所占比例均近似相同。群體遺傳學(xué)分析表明這兩個(gè)位點(diǎn)未達(dá)到Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P＜0.05），在所研究的群體中，處于中度多態(tài)。FQ-PCR結(jié)果表明，hsp70基因mRNA在肝臟中表達(dá)最高，chip基因mRNA在心臟中表達(dá)最高，三個(gè)位點(diǎn)中只有chip基因1407位點(diǎn)在兩頭牛中存在不同基因型，分別是AB、BB型，其中BB型個(gè)體CHIP表達(dá)量高于AB基因型個(gè)體。
　　 利用SAS8.

5、0軟件，對(duì)hsp70和chip基因的3個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的基因型與直腸溫度和紅細(xì)胞鉀濃度進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果表明:hsp70基因1524位點(diǎn)AA型個(gè)體紅細(xì)胞濃度顯著高于AB型個(gè)體，但該位點(diǎn)屬于低度多態(tài)所以有待于擴(kuò)大樣品量進(jìn)行證實(shí);chip基因719位點(diǎn)不同基因型對(duì)直腸溫度和紅細(xì)胞鉀濃度沒(méi)有顯著差異，1407位點(diǎn)不同基因型的直腸溫度沒(méi)顯著差異，而對(duì)紅細(xì)胞鉀濃度BB基因型顯著低于AA和AB兩個(gè)基因型。通過(guò)以上結(jié)果說(shuō)明chip基因1407位點(diǎn)BB基因型