鴨飼料中黃曲霉毒素B1污染的流行病學(xué)調(diào)查、致病作用及其防治方法研究.pdf

1、黃曲霉毒素(aflatoxin，AF)是一種毒性極強(qiáng)的物質(zhì)，被世界衛(wèi)生組織列為Ⅰ類致癌物。AF中以黃曲霉素B1(Aflatoxin B1，AFB1)分布最廣、毒性最大。本研究開展了鴨飼料及其原料中AFB1的污染情況調(diào)查，探討了AFB1對(duì)鴨的致病作用及其防治方法。
　　1.鴨飼料中黃曲霉毒素B1污染的流行病學(xué)調(diào)查
　　采用ELISA方法，對(duì)某公司鴨飼料原料供應(yīng)地的玉米、豆粕、花生粕進(jìn)行抽樣檢測，調(diào)查黃曲霉毒素B1(AFB1)的

2、污染程度。(1)2013年10月～2014年9月，國內(nèi)各產(chǎn)區(qū)玉米被AFB1污染程度依次為:華中區(qū)域＞華東區(qū)域＞西北區(qū)域＞華北區(qū)域＞東北區(qū)域，AFB1檢出率依次為100％、52.4％、29.2％、19％、15.4％;華中區(qū)域、華東區(qū)域AFB1超標(biāo)(AFB1含量均在20μg/kg)率分別為85.7％、33.3％，華北、東北、西北三大區(qū)域未檢測到超標(biāo)的樣品。2014年10月～2015年9月年，國內(nèi)各產(chǎn)區(qū)玉米被AFB1污染程度明顯降低，但仍有污

3、染，且在區(qū)域分布差異上與上一年度相似，按照檢出率排序依次為:華中區(qū)域＞華東區(qū)域＞西北區(qū)域＞華北區(qū)域＞東北區(qū)域，檢出率依次為33.3％、24.4％、24.1％、9.3％、7.3％。華中區(qū)域、華東區(qū)域超標(biāo)率分別為8.3％、4.4％，華北、東北、西北三大區(qū)域未檢測到超標(biāo)的樣品。從以上檢測結(jié)果來看，玉米作為動(dòng)物飼料主要能量原料，在2013～2014年度受AFB1的嚴(yán)重污染，2014～2015年度污染較輕，且在同一年份中的污染程度呈明顯的區(qū)域分布

4、。(2)2013年10月～2014年9月，河南、山東所采90個(gè)花生粕樣品中，AFB1檢出率均高達(dá)100％，超標(biāo)率分別達(dá)到85.1％和93.8％。2014年10月～2015年9月，河南、山東所采131份樣品中，AFB1檢出率分別達(dá)到96.9％和100％，超標(biāo)率分別達(dá)77.3％和85.3％。以上檢測結(jié)果說明花生粕中AFB1的污染在不同區(qū)域和年份污染均非常普遍。(3)2013年10月～2015年9月，共檢測豆粕樣品50份，檢出率10％，且檢出

5、樣品AFB1含量均在10μg/kg以內(nèi)，未見超標(biāo)樣品。
　　2013年～2015年間，通過走訪山東、安徽、江蘇、湖北等省份的養(yǎng)殖場，收集現(xiàn)場信息，使用ELISA方法檢測鴨飼料中AFB1的含量，結(jié)合臨床癥狀、病理變化、內(nèi)臟組織病理學(xué)切片，分析飼料中AFB1超標(biāo)對(duì)肉鴨、蛋鴨生產(chǎn)性能的影響。一共收集到12個(gè)因使用AFB1超標(biāo)鴨飼料（含量在32μg/kg～102μg/kg不等）而導(dǎo)致鴨群發(fā)生明顯中毒癥狀的養(yǎng)殖場。調(diào)查結(jié)果顯示，飼料中AFB

6、1超標(biāo)對(duì)肉鴨產(chǎn)生嚴(yán)重影響，可導(dǎo)致中毒癥狀的發(fā)生，死淘率增加10％～20％，死亡階段主要集中在1～2周齡。臨床可見，鴨群采食量降低，精神萎頓，有的排白色或綠色稀糞;病程長的雛鴨，出現(xiàn)消瘦，呆立，翅膀下垂;驅(qū)趕時(shí)病鴨勉強(qiáng)能夠走動(dòng)，但步態(tài)不穩(wěn)，有的癱瘓;死前角弓反張。大體病變可見肝臟腫大，出血，質(zhì)脆弱，部分死鴨肝質(zhì)地變硬;肝臟顏色變淡變黃，有的發(fā)綠;膽囊腫大、充盈，膽汁發(fā)黃。組織切片可見肝細(xì)胞發(fā)生空泡變性、脂肪變性，并能看到膽管上皮增生。產(chǎn)蛋

7、鴨未見明顯的死亡，主要表現(xiàn)為鴨群產(chǎn)蛋下降、蛋重變輕，產(chǎn)蛋率可下降50％～80％，蛋均重下降20％～30％。
　　2.黃曲霉毒素B1對(duì)鴨致病性的實(shí)驗(yàn)研究
　　本試驗(yàn)旨在研究實(shí)驗(yàn)條件下飼料中AFB1對(duì)鴨生產(chǎn)性能的影響，以及內(nèi)臟器官病理學(xué)變化。選用1日齡SM4商品代白羽肉鴨160只，隨機(jī)分配到2組（分別為對(duì)照組和AFB1組）中，每組80只。對(duì)照組飼喂由正常玉米配制的飼料(AFB1含量為8μg/kg)，AFB1組飼喂由霉變玉米配制的

8、飼料(AFB1含量為60μg/kg)。所有試驗(yàn)動(dòng)物自由采食、飲水，飼養(yǎng)期28 d。每天記錄采食量、臨床癥狀及死亡情況，剖檢死亡鴨，記錄大體病變。28日齡時(shí)，屠宰所有試驗(yàn)鴨，稱重，計(jì)算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比;采集肝臟、脾臟、腎臟、胰腺等器官的組織塊，制作組織病理學(xué)切片進(jìn)行觀察。
　　(1) AFB1組的試驗(yàn)?zāi)┲睾蛯?duì)照組相比減輕了12.40％，差異顯著（P＜0.05）。說明飼料中污染AFB1后，對(duì)肉鴨增

9、重產(chǎn)生顯著影響。(2)對(duì)照組、AFB1的平均日采食量(ADFI)分別為114.48g、107.05 g，AFB1組日均采食量與對(duì)照組相比下降了6.49％，差異顯著（P＜0.05）。說明飼料中污染AFB1后，會(huì)顯著降低肉鴨采食量。(3)對(duì)照組、AFB1組、的料重比(F/G)分別為1.70，1.82。AFB1組比對(duì)照組的料重比提高了0.12，差異顯著（P＜0.05）。說明飼料中污染AFB1后，會(huì)顯著提高肉鴨料重比。(4)對(duì)照組、AFB1組的

10、死亡率分別為1.25％、11.25％，AFB1組比對(duì)照組死亡率升高，差異顯著(P＜0.05)。說明飼料中污染AFB1后，會(huì)顯著增加鴨群的死亡率。(5)通過觀察AFB1組的肝臟組織病理學(xué)切片可見，肝細(xì)胞腫脹，肝竇狹窄甚至消失，部分發(fā)生水泡變性;匯管區(qū)膽管上皮增生，增生的膽管上皮呈腺管樣排列或散在分布于肝細(xì)胞之間，嚴(yán)重的可見小膽管數(shù)量明顯增多。脾臟組織結(jié)構(gòu)基本正常未受到影響。腎小管上皮細(xì)胞顆粒變性，腎臟內(nèi)小血管擴(kuò)張，充血。胰腺可見局灶性壞死

11、，壞死灶內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤。
　　以上試驗(yàn)結(jié)果可見，通過使用AFB1超標(biāo)的玉米配制的肉鴨全價(jià)配合日糧，復(fù)制出了AFB1中毒的臨床病例。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)證實(shí)含60μg/kg AFB1日糧能夠顯著降低28日齡出欄的肉鴨生產(chǎn)性能，造成肝臟的明顯損傷，導(dǎo)致肝臟脂肪變性和膽管增生，并有誘發(fā)癌變的傾向。
　　3.不同種類脫霉劑對(duì)黃曲霉毒素B1及營養(yǎng)物質(zhì)的吸附作用比較研究
　　本試驗(yàn)旨在比較不同種類脫霉劑對(duì)AFB1及營養(yǎng)物質(zhì)的吸附作用，并

12、通過動(dòng)物試驗(yàn)，研究脫霉劑對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響。試驗(yàn)中選擇的3種脫霉劑分別為:脫霉劑A，主要成分為水合硅鋁酸鹽;脫霉劑B，主要成分為β-1，3-D-葡聚糖和甘露寡糖;脫霉劑C，某國際知名品牌脫霉劑，主要成分是水合硅鋁酸鹽與酵母細(xì)胞壁提取物的復(fù)合物。試驗(yàn)選用的試驗(yàn)動(dòng)物為1日齡SM4商品代白羽肉鴨。
　　(1)分別在濃度為70μg/kg的AFB1溶液中按照2 mg/ml、3 mg/ml、4 mg/ml的濃度添加脫霉劑A，隨著添加量的增加

13、，脫霉劑A對(duì)溶液中AFB1吸附率顯著增加（P＜0.05），分別為57.14％、68.57％、74.29％，但其單位質(zhì)量的吸附量呈下降趨勢，其吸附量分別為20μg/g、16μg/g、13μg/g。分別在濃度為70μg/kg的AFB1溶液中按照0.5 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml的濃度添加脫霉劑B后，隨著添加量的增加，溶液中AFB1濃度和吸附前均無顯著差異(P＞0.05)，吸附率分別為8.57％、10.00％、7.14％，其單

14、位質(zhì)量吸附量分別為12μg/g、7μg/g、2.5μg/g。分別在溶液中按照0.5 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml的濃度添加脫霉劑C后，隨著添加量的增加，脫霉劑C對(duì)溶液中AFB1吸附率顯著增加(P＜0.05)，分別為42.86％、64.29％、78.57％;但其單位質(zhì)量吸附量呈下降趨勢，其吸附量分別為60μg/g、45μg/g、27μg/g。(2)在維生素B1溶液（對(duì)應(yīng)檢測樣品濃度為100％）中以50mg/ml的濃度分別添加

15、脫霉劑A、B、C，模擬吸附后，脫霉劑A和脫霉劑C對(duì)維生素B1有較強(qiáng)的吸附作用，吸附率均達(dá)到了100％，脫霉劑B對(duì)維生素B1無吸附作用。在維生素B6溶液（對(duì)應(yīng)檢測樣品濃度為100％）中以50 mg/ml的濃度分別添加脫霉劑A、B、C模擬吸附，三種脫霉劑對(duì)維生素B6的吸附率分別達(dá)到18.3％、5.08％、25.42％。在維生素E溶液（對(duì)應(yīng)檢測樣品濃度為50％）中以50mg/ml的濃度分別添加脫霉劑A、B、C，模擬吸附后，脫霉劑A和脫霉劑B對(duì)

16、維生素E無吸附作用，脫霉劑C對(duì)維生素E有吸附作用，其對(duì)維生素E的吸附率為12.67％。(3)在濃度為73 mg/100ml的礦物質(zhì)銅的溶液中以50 mg/ml的濃度分別添加脫霉劑A、B、C，模擬吸附后，三種脫霉劑對(duì)礦物質(zhì)銅的吸附率分別達(dá)到37.45％、3.20％、42.01％。在礦物質(zhì)鐵、錳、鋅的溶液中以50 mg/ml的濃度分別添加脫霉劑A、B、C，模擬吸附后，鐵、錳、鋅濃度和吸附前均無顯著差異（P＞0.05）。(4)根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果

17、，選用脫霉劑A進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)。試驗(yàn)參照第二部分方法進(jìn)行，對(duì)照組AFB1含量為52μg/kg，試驗(yàn)1組AFB1含量為3μg/kg，試驗(yàn)2組為試驗(yàn)1組基礎(chǔ)上增加0.4％脫霉劑A。試驗(yàn)結(jié)果可見:試驗(yàn)2組的試驗(yàn)?zāi)┲乇仍囼?yàn)1組提高了11.80％，差異顯著(P＜0.05);試驗(yàn)2組和對(duì)照組相比無顯著差異(P＞0.05)。試驗(yàn)2組的平均日采食量(ADFI)達(dá)到115.75 g，比試驗(yàn)1組提高了6.81％，差異顯著（P＜0.05）;試驗(yàn)2組和對(duì)照組在AD

18、FI上無顯著差異（P＞0.05），且有增高的趨勢。試驗(yàn)2組的料重比(F/G)為1.71，比試驗(yàn)1組降低了0.08，差異顯著（P＜0.05）;試驗(yàn)2組料重比比對(duì)照組高0.04，差異顯著（P＜0.05）。試驗(yàn)2組的死亡率為1.25％，與試驗(yàn)1組(8.75％)差異顯著(P＜0.05);試驗(yàn)2組死亡率和對(duì)照組無顯著差異(P＞0.05)。本動(dòng)物試驗(yàn)說明在AFB1污染的飼料中添加脫霉劑A可以有效緩解AFB1對(duì)肉鴨增重、平均日采食量死亡率的影響，能夠