犬瘟熱病毒石河子株的初步分離及核衣殼蛋白基因原核表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文犬瘟熱病毒石河子株的初步分離及核衣殼蛋白基因原核表達(dá)姓名：楊井泉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：薄新文201106IIAbstractCaninedistemperisacaninedistempervirus(CaninedistempervirusCDV)infectioncausedbyanacutefebrilehighlycontagiousdiseasestherefeitiscurrent

2、lyoneofthemostdamaginganimaldiseasesonthedogindustrythefurindustryanimalbreedingwildlifetrade.InthisstudyaRTnestedPCRassayfdetectingCaninedistempervirus(CDV)wasestablishedusing2pairsofprimers.Theprimersweredesignedusingn

3、ucleocapsidprotein(NP)geneinfmationofCDVOnderstepotstraininGenBank.TheassayamplifiedonlyaNPgenefromCDV：butnotfromothervirussuchasRabiesvirus(RV)Canineparvovirus(CPV)Verocell.Serial10folddilutionsof106TCID50CDV3strainwere

4、usedfbothPCRRTnestedPCR.ThelowerdetectionlimitfCDVRNA106103dilutionsftheRT–nestedPCRthetraditionsRTPCRrespectively.TheRTnestedPCRmethodwassuccessfullyusedtodetectfsuspectedCDVinfectioninclinicalsamplesfromShihezi，thuscou

5、ldbeusefulftheclinicalsamplesfromdifferenttissues.ItaslocanbeusedfaquickdiagnosisofCDtheepidemiologicalinvestigation.InthisstudythesupernatantofthetissuefromthedogsinfectedCDVwasinvestigatedonVerothecytopathicwasappeared

6、after5generationsthroughblindpassages.RTnestedPCRwasusedtodetectthesupernatantofcelllysisharvestedfrozen.TheCytopathicwerealongstretchinthecellnumerousroundcellsshrinkageofcellularmembranecellaggregatedattachedtothesurfa

7、ceofothercells.ThespecificbofPCRproductwasappearedbyelectrophesis.TheresultsshowedthatThespecificbofPCRproductistheCDVsequencespecificnucleicacidsequences.CompoundwiththesupernatantofthetissuefromthedogsinfectedCDVthecoi

8、ncidenceratewas100%indicatingthatthesupernatantofthetissuefromthedogsdidnotresultinDNAmutationstherefethesupernatantofCDVShiheziinfectedfrozencellwasharvested.Inthisstudytheprimersofthefulllengthnucleocapsidproteinthehem

9、agglutiningenesequencesofCDVShiheziOnderstepotattenuatedstraininGenBankweredesigenedtoamplifytheNPgeneofCDVShihezistrainanalysisthesequence.TheresultsshowedthattheNPgeneofCDVShihezistrainwassuccessfullyclonedtheproteinen

10、codedepitopeswereanalyzed.Theresultsshowthatamplificationofthenucleocapsidproteingenewas1688bpacompleteopenreadingframe(F)was1572bpencoding523aa.NucleicacidsequencehomologyphylogeicanalysisshowedthatCDVstrainsHM596313Shi

11、hezistrainshared100%identityattheaminoacidlevelonlytwobasedifferencesofthenucleicacidsequences.Hemagglutiningenewas607bpencoding202aasharedwithTNstrain(AY390347)aminoacidhomologywas98.02%withJapanKDK1strain(AB025271)was9

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