SARS冠狀病毒核蛋白的原核表達及初步應用的研究.pdf

1、嚴重急性呼吸道綜合癥(SARS),亦稱傳染性非典型肺炎.是于2002年1月中旬在中國華南地區(qū)首先出現(xiàn)的一種新型的呼吸系統(tǒng)綜合癥.隨后,SARS在中國內地和香港、加拿大、新加坡、越南等地呈現(xiàn)暴發(fā)行流行的趨勢.SARS的病源已被確認為一種新型冠狀病毒(或冠狀病毒變異株),即SARS冠狀病毒(SRAS-CoV),在短短一個月間,十余株不同SRAS-CoV的全基因序列已登錄美國國家生物技術信息中心(NCBI)的GeneBank.在已知類似冠狀病

2、毒開放閱讀框分析的基礎上,對SARS-CoV初步的基因組注釋已經(jīng)完成,根據(jù)其基因編碼,預測得到的主要蛋白質有RNA聚合酶蛋白、刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、核衣殼蛋白(簡稱核蛋白,N)、膜蛋白(M)等.以往對動物冠狀病毒結構蛋白的研究發(fā)現(xiàn),冠狀病毒的N蛋白在病毒復制和產(chǎn)生的病理反應中起重要作用.該研究擬用重組SARS冠狀病毒N蛋白建立間接ELISA,檢測SARS患者血清標本中抗SARS冠狀病毒N蛋白的抗體IgM、IgG.了解SARS冠

3、狀病毒N蛋白在人體內的免疫原性.旨在闡明SARS冠狀病毒感染機體免疫應答的機制,為研究SARS冠狀病毒感染的機制和有效的診斷試劑及亞單位疫苗提供依據(jù).在研究中,首先通過RT-PCR特異性擴增編碼N蛋白基因,然后克隆至原核表達載體pET32a+,構建重組表達質粒并轉化大腸桿菌BL21,經(jīng)IPTG誘導獲得了高效表達的分子量約為66KD的重組蛋白包涵體,且能與SARS病人血清發(fā)生特異性反應.利用切膠純化的重組蛋白,該研究又對其應用進行了初步探