家蠶ovo及out基因的研究.pdf

1、本文對家蠶ovo及out基因進行了研究。果蠅(Drosophila)卵巢的正常發(fā)育需要一系列基因共同參與,其中ovo和otu基因與卵巢發(fā)育密切相關(guān)。家蠶是鱗翅目昆蟲的模式種,有關(guān)家蠶卵巢發(fā)育相關(guān)基因及分子機制的研究報道甚少。本研究以GenBank中已公開的果蠅(Drosophilamelanogaster)OVO蛋白B亞型(GenBank登錄號:NP726971)氨基酸序列為基礎(chǔ)通過電子克隆的方法獲得家蠶ovo(Bmovo)。通過RT-

2、PCR在家蠶精巢、卵巢組織中分別獲得了Bmovo基因的3種可變剪接亞型,分別命名為Bmovo-1、Bmovo-2和Bmovo-3。同源比對顯示BmOVO-1和BmOVO-2各含有1個第18家族殼多糖酶(chitinase)的活性位點,3個C2H2型的鋅指結(jié)構(gòu)基序,BmOVO-3只含有3個C2H2型的鋅指結(jié)構(gòu)基序,暗示BmOVO可能屬于轉(zhuǎn)錄因子并有可能參與能量代謝。家蠶卵巢來源的BmN細胞定位結(jié)果顯示BmOVO主要定位于細胞核。實時定量P

3、CR(Real-Time PCR)結(jié)果顯示Bmovo mRNA的豐度在家蠶卵巢組織中最高,在血細胞中最低。Western blotting結(jié)果顯示Bmovo在卵巢和脂肪體中都能表達。通過RNA干擾(RNA interference,RNAi)下調(diào)和轉(zhuǎn)基因超表達上調(diào)Bmovo表達水平初步探討了基因的功能,結(jié)果顯示對家蠶幼蟲注射雙鏈RNA(dsRNA)后,與空白對照組相比實驗組蠶卵的受精率無明顯變化,孵化率稍微下降,但造卵數(shù)下降比較明顯,造

4、卵數(shù)下降約15％,并且數(shù)據(jù)顯示造卵數(shù)、孵化率的下降是由于對雌蠶注射dsRNA引起的；雌蠶注射dsRNA后蛹體重、繭層量均增加約10％,雄蠶注射dsRNA后蛹體重增加約1.0％,但繭層量增加約10.8％；家蠶超表達BmOVO-1對性腺發(fā)育、造卵數(shù)、受精率和孵化率等沒有影響,GO、G1代能夠正常生殖發(fā)育。以果蠅Otu蛋白B亞型(GenBank登錄號：NP_511089)的氨基酸序列為基礎(chǔ)通過電子克隆的方法獲得家蠶out(Bmotu)基因序列