星星草GAPDH和OPDR基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、星星草(Puccinellia tenuiflora)作為一種生長(zhǎng)在北方地區(qū)的禾本科牧草,具有較強(qiáng)的耐鹽堿性。在分子水平研究鹽堿脅迫下星星草的耐鹽堿基因和相關(guān)的抗逆機(jī)制對(duì)提高植物耐鹽性、提高鹽堿土壤利用率具有重要的意義。前期試驗(yàn)采用芯片雜交技術(shù)從星星草中篩選出了一批在鹽堿脅迫下高豐度表達(dá)的基因,其中包括代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶GAPDH和OPDR。本試驗(yàn)主要是通過(guò)星星草抑制性消減雜交文庫(kù)(suppressionsubtractive hybr

2、idization library,SSH)中GAPDH和OPDR的基因片段,對(duì)其進(jìn)行全長(zhǎng)的克隆。并利用生物信息學(xué)手段分析其基因序列、蛋白序列并構(gòu)建基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。同時(shí)研究在不同Na2CO3脅迫下這兩個(gè)基因的表達(dá)變化情況,為進(jìn)一步研究星星草耐鹽堿機(jī)理奠定一定的基礎(chǔ)。本研究的結(jié)果如下:
　　 (1)以耐鹽堿植物星星草為試材,構(gòu)建星星草RACE cDNA文庫(kù)。然后采用RACE技術(shù)從星星草中克隆出GAPDH和OPDR這兩個(gè)基因的全長(zhǎng)

3、序列。
　　 (2)通過(guò)克隆獲得的GAPDH和OPDR基因全長(zhǎng)分別為1030 bp和978 bp,然后對(duì)這兩個(gè)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析得知:GAPDH和OPDR基因的開(kāi)放閱讀框內(nèi)可分別編碼含339和326個(gè)氨基酸的多肽鏈。GAPDH蛋白含有兩個(gè)保守區(qū)它們分別屬于Gp dh C superfamily和Gp dh N superfamily。經(jīng)Blast分析得知:GAPDH基因與高羊茅,大麥中該基因同源性高達(dá)97％;OPDR基因與日