水蕨centrin基因的克隆表達(dá)與分析.pdf

1、中心蛋白（centrin）是EF-hand鈣結(jié)合蛋白，是鈣調(diào)蛋白超家族中的一員。它含有4個(gè)EF-hand結(jié)構(gòu)基元，每個(gè)結(jié)構(gòu)基元能結(jié)合一個(gè)鈣離子，是很多生物體（如藻類、酵母、原生動(dòng)物、高等植物、哺乳動(dòng)物等）的微管組織中心（中心體、基體或紡錘極體）的重要組成部分。中心蛋白在細(xì)胞的正常分裂以及包含中心蛋白的纖維系統(tǒng)收縮中起重要作用。
　　蕨類植物精子發(fā)生是生毛體、基體、鞭毛等運(yùn)動(dòng)細(xì)胞器重新發(fā)生和組織的過(guò)程，中心蛋白(centrin)是否

2、參與蕨類運(yùn)動(dòng)細(xì)胞器發(fā)生尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)采用蕨類模式植物水蕨作為實(shí)驗(yàn)材料，克隆了其centrin基因的完整序列，構(gòu)建其原核表達(dá)載體，并在大腸桿菌中有效表達(dá)，為后續(xù)研究centrin基因在蕨類精子運(yùn)動(dòng)細(xì)胞器發(fā)生中的作用具有重要的意義。
　　選用水蕨(Ceratopteristhalictroides(L.)Brongn)作為實(shí)驗(yàn)材料，以配子體中提取的RNA為模板，應(yīng)用RACE(Rapid-amplificationofcDNAends

3、)技術(shù)成功克隆出水蕨中centrin全長(zhǎng)cDNA序列。通過(guò)生物信息學(xué)分析表明:該基因全長(zhǎng)為1077bp，完整開(kāi)放讀碼框(ORF)的長(zhǎng)度為512bp，編碼127個(gè)氨基酸。把測(cè)序得到的序列進(jìn)行Blast序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)所獲得的centrin基因序列與與其他物種的該基因序列具有較高的同源性。應(yīng)用Clustalx和MEGA5軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，并進(jìn)行了同源性分析。結(jié)果顯示，水蕨centrin基因與蘋、小立碗蘚、雙鞭毛水藻聚為一類，表明它們相近