廣西豬流感病毒分離及全基因序列分析.pdf

1、2008年8月至2010年3月期間，本研究通過(guò)收集全區(qū)各地疑似豬流感(Swineinfluenza，SI)的臨床樣品進(jìn)行病毒分離。應(yīng)用雞胚接種和細(xì)胞培養(yǎng)共分離到兩株豬流感病毒(Swineinfluenzavirus，SIV)，通過(guò)對(duì)8個(gè)片段的全基因克隆及序列分析，證實(shí)為H1N2和H1N1亞型SIV。將分離株命名為A/swine/Guangxi/NNGN3/2009(H1N2)（簡(jiǎn)稱(chēng)GN3株）和A/swine/Guangxi/LB144/

2、2009(H?N1)（簡(jiǎn)稱(chēng)LB144株）。另外，本研究也對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保存的A/swine/Guangxi/LGX1/2006(H3N2)（簡(jiǎn)稱(chēng)LGX1株）和A/swine/Guangxi/LGX3/2005(H3N2)（簡(jiǎn)稱(chēng)LGX3株）進(jìn)行序列分析。
　　 對(duì)GN3株和LB144株各基因關(guān)鍵位點(diǎn)分析，發(fā)現(xiàn)GN3株HA基因第190、220、225、226、228位(H3亞型HA1位置)氨基酸殘基分別為D、R、D、Q、G，表明其可與S

3、Aα-2，6-Ga1受體結(jié)合；在HA裂解位點(diǎn)只有單個(gè)R，不具備高致病性毒株HA序列特征；PB2基因第627、701位分別為E、D；PB1-F2為34個(gè)氨基酸組成的截短多肽；NS1第92位為D，且不具備PDZ配體功能域序列，這些都說(shuō)明GN3株為低致病性SIV。耐藥性基因位點(diǎn)中，NA基因119E、274H、292R、294N和M2基因31S，表明GN3株對(duì)神經(jīng)氨酸酶抑制類(lèi)、M2離子通道作用類(lèi)抗病毒藥物依然敏感。
　　 LB144株P(guān)

4、B2基因627E、701N；NS1基因的PL基序(GPKV)都表明其為低致病性SIV。耐藥性基因位點(diǎn)中，NA基因119E、274Y、292R、294N和M2基因31S，表明LB144株已對(duì)奧司他韋產(chǎn)生耐藥性，但依然對(duì)M2離子通道作用類(lèi)抗病毒藥物依然敏感。
　　 系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化與核酸同源性分析結(jié)果顯示，GN3株為“人-豬-禽”三源重配SIV，且具有類(lèi)似于北美地區(qū)三源重配SIV的TRIG(Triplereassortantintern

5、a1gene，TRIG)盒，其基因來(lái)源情況為：PB2和PA基因來(lái)源于北美禽源譜系；PB1基因來(lái)源于北美“三重配SIV株”人源譜系；HA、NP和M基因來(lái)源于古典H1N1豬源譜系；NA來(lái)源于H3N2人源譜系；NS來(lái)源于三重配豬源譜系。GN3株分別與Sw/GX/13/06和Sw/Hainan/1/05保持較高的親緣性，并與香港分離株Sw/HK/NS623/02關(guān)系最密切。而LB144株P(guān)B2、NP、NA、M和NS基因都來(lái)源于歐洲類(lèi)禽譜系，證實(shí)