江蘇濕地越冬野鴨中A型流感病毒的檢測及基因序列分析.pdf

1、參考Lee等報(bào)道的NP基因的引物，建立A型流感病毒的RT-PCR檢測方法，檢測2004年10月到2005年3月從江蘇省的洪澤湖、高郵湖、鹽城濕地自然保護(hù)區(qū)內(nèi)13種野鴨采集的256份泄殖腔拭子，檢測結(jié)果顯示，52.34％(134／256)的野鴨帶有A型流感病毒，其中綠頭鴨、花臉鴨、白秋沙鴨、翹鼻麻鴨大于等于80％，表明在江蘇省越冬的野鴨流感病毒帶毒率非常高。通過SPF雞胚尿囊腔接種法進(jìn)行病毒分離，分離到23株病毒，經(jīng)國家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室鑒

2、定為A型禽流感病毒。雞胚分離率為8.98％(23／256)。 將綠翅鴨分離株A／Common Teal／XuYi／04和斑嘴鴨分離株spdkYC1905、spdkXy2305、spdkXy2505四株分離株的NP基因330bp片斷RT-PCR擴(kuò)增克隆測序，序列在GenBank上Blast，結(jié)果顯示，A／Common Teal／XuYi／04與人源及豬源的H3N2同源性為95％；spdkYC1905與1997年香港H5NI同源性為

3、96％：spdkXy2305與2004年東南亞暴發(fā)的H5N1型HPAIV同源性高達(dá)99％：spdkXy2505與2000年以來我國香港、廣西等地各種來源的H5N1同源性為96％。說明江蘇濕地野鴨中存在的流感病毒具有重要的公共衛(wèi)生意義，同時(shí)對畜牧業(yè)造成潛在威脅。 對禽流感病毒綠頭鴨盱眙分離株maXY804的HA、PB2、NP、M、NS基因進(jìn)行克隆測序，序列在GenBank上Blast，結(jié)果顯示，在GenBank數(shù)據(jù)庫中沒有與maX

4、Y804的HA、PB2、NP、M、NS基因完全匹配的序列。上述蛋白基因與不同地區(qū)的流感病毒分離株有不同的親緣關(guān)系。NP、NS基因與歐洲的流感病毒同源性高，M、PB2與我國沿海地區(qū)分離的流感病毒同源性高。 對10株本實(shí)驗(yàn)分離的流感病毒分離株的M基因進(jìn)行分析，結(jié)果表明，這10株分離株的M基因可以分為兩簇：第一簇包括7株：綠頭鴨分離株maGY3305、maXY804；斑嘴鴨分離株spdkYC1905、spdkXy2505；花臉鴨分離株

5、btHZ1605、btXY1805及普通秋沙鴨分離株gsdHZ705；第二簇包括3株：花臉鴨分離株btXY1705、斑嘴鴨分離株spdkXy2305和綠頭鴨分離株maGY3105。第一簇與意大利火雞中的低致病力的tkIt02(H7N3)在同一進(jìn)化分枝上，同源性為97.6％。第二簇btXY1705、spdkXy2305、maGY3105與從鄱陽湖健康野鴨中分離的禽流感病毒midkJx05(H5N1)N源高達(dá)99.3％～99.8％；與引起青

6、海湖斑頭雁暴發(fā)HPAIV的blhgsQh05(H5N1)及汕頭家鴨中的dkST03(H5N1)同源性為98.5％～98.7％；與2004-2005年在越南及泰國的雞、鴨、虎、貓及人的HPAIV H5N1和2002年引起香港公園里野生水禽暴發(fā)HPAIV的bhgHK03(HSNl)以及2001年從福建的豬分離的病毒swFj03(H5N1)同源性在98.1％～98.5％。 對10株分離株的基質(zhì)蛋白M1、M2的氨基酸序列進(jìn)行分析，結(jié)果表明，綠

7、頭鴨分離株maGY3105、斑嘴鴨分離株spdkXy2305的M1蛋白與2003年以來東南亞地區(qū)流行的Z和Z+基因型的HPAIV有很大的相似性但并不完全相同。花臉鴨分離株btxy1705、斑嘴鴨分離株spdkXy2305、綠頭鴨分離株Magy3105與江西鄱陽湖健康的遷徙野鴨分離的V基因型的A／migratory-duck／Jiangxi／2300／2005(H5N1)等M1蛋白序列完全相同，表明江蘇省越冬野鴨中的流感病毒與鄱陽湖野鴨中