廣西類禽型H1N1豬流感病毒分離鑒定和基因序列的測定分析.pdf

1、本研究從廣西采集的365份豬棉拭子樣品接種雞胚,收集尿囊液,分離了3株具有血凝活性的流感病毒。用 RT-PC R對分離的3株病毒的HA、NA部分基因進行測序分析,鑒定出分離的3株流感病毒均是類禽H1N1豬流感病毒,分別命名G14、G21和G30。
　　通過對G14、G21、G30三株流感病毒的HA基因的進化樹分析發(fā)現(xiàn)3株病毒和A/swine Zhejiang/1/2007的親緣性最近。通過對三株病毒的各基因的關(guān)鍵點分析發(fā)現(xiàn): G1

2、4、G21、G30三株病毒的氨基酸受體相同,分別是148-152(GVTAA)、167(W)、197(H)、204(D)、208(L)、209(Y)。G14、G21、G30三株流感病毒氨基酸受體和親緣性最近的A/swine/Hungary/19774/2006和A/swine/Zhe jian g/1/2007的氨基酸受體結(jié)合位點一致并沒有發(fā)生變化。G14、G21、G30三株病毒HA1蛋白的氨基酸裂解位點也較為保守,裂解位點為 PSIQ

3、YR↓GLFGAI,此變異沒有堿性氨基酸的存在,不符合高致病性流感毒株的分子特征,且裂解位點周圍氨基酸序列非常保守,并且三株毒株均一致。
　　通過對三株分離株流感病毒的糖基化位點分析發(fā)現(xiàn)G14、G21、G30三株分離株的HA有7個糖基化位,并且7個位點糖基化位相同,分別是:27(NNST)、28(NSTD)、40(NVTV)、212(NHTY)、291(NCTT)、498(NGTY)、557(NGSL)。其中HA1有5個糖基化位點

4、,HA2有2個糖基化位點。三株分離株和A/swine/Hungary/19774/2006進行糖基化位點比較發(fā)現(xiàn)三株分離株增加了21位糖基化位點。三株分離株和A/swine/Zhejiang/1/2007糖基化位點相同,沒有增加也沒減少。NA有6個糖基化位點分別為235(NGSC)、146(NGTI)、88(NSSL)、68(NVSN)、63(NQTY)、8(NNTW)。G14、G21、G30三株流感病 NA的毒糖基化位點和A/swin

5、e/Zhejiang/1/2007代表株基本一致,只是G21的第68糖基化位點(NVSN)和代表株的68位糖基化位點(NISV)發(fā)生了變異。糖基化位點的增加和減少對分離株的致病力、抗原特性、和藥物抗性影響都比較大。三株分離株 G14、G21、G30可能在致病力,抗原特性,和藥物抗性上都一定的變化。M基因?qū)Σ《镜哪退幮云鸷艽笞饔?根據(jù)藥物試驗證實,L26F、V27A、A30T、S13N、G34E如果這些位點其中一個發(fā)生變異將可能直接影響病