豬流感病毒的分離鑒定及NA基因的序列分析.pdf

1、豬流感(SI)是由豬流感病毒(Swine influenza virus，SIV)引起的不同日齡、性別和品種豬的一種群發(fā)性呼吸道傳染病。迄今為止，SI已遍布美、歐、亞、非等世界各地。豬流感的暴發(fā)，對全球養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。因此，了解SI在我國的流行情況并對其研究，不僅可促進我國畜牧業(yè)的健康穩(wěn)定發(fā)展，也是防止人類流感流行的重要環(huán)節(jié)。 本研究從廣西各地收集有呼吸癥狀的鼻粘液、氣管粘液和病變肺組織，將經(jīng)RT-PCR初步檢測為陽

2、性的樣品，用11日齡雞胚接種后分離到3株SIV，經(jīng)HI、RT-PCR鑒定，其中GXHZ株為H1N2亞型毒株，GXLZ、GXXY株為H3N2亞型毒株。然后對分離株進行EID50及GXHz株的攻毒豬試驗研究。結果表明：病毒稀釋后接種11日齡雞胚，不能導致雞胚的死亡，3株SIV廣西分離株GXHZ、GXLZ和GXXY的EID50分別為10-5.3EID50/0.2ml，10-4.7EID50/0.2ml與10-5.5 EID50/0.2ml。G

3、XHZ株攻毒豬后沒有明顯的臨床癥狀，只在第四、五天從采集的豬鼻粘液中重新分離到病毒。 用一對特異性引物NA1、NA2經(jīng)RT-PCR法擴增了分離到的3株SIV的NA基因的cDNA片段，測定核苷酸序列，并推導出相應的氨基酸序列與國內外相應序列進行比較。 結果表明，所擴增的3株SIV病毒NA基因長度均為1410個核苷酸，共編碼469個氨基酸，3個分離株之間的核苷酸和氨基酸同源性很高，分別達到99.8％以上和99.4以上。3株分

4、離株的NA基因序列與已發(fā)表H1N2、H3N2亞型參考毒株的同源性較高，核苷酸同源性分別達到了82.9～98.1％、97.0～99.7，氨基酸同源性分別達了83.2～98.5％、96.8～99.4。與參考的近年發(fā)表毒株EF556202(A/swine/Guangxi/17/05(H1N2))，EF566204(A/swine/Hainan/1/05(H1N2))，EF556200(A/swine/Guangxi/13/06(H1N2))，

5、AF251412(A/Swine/Iowa/533/99(H3N2))比較結果發(fā)現(xiàn)，核苷酸的同源性為97.4～99.7％，氨基酸同源性為97.9～99.4％。與古典型參考的代表毒株D00715(A/sw/Hong Kong/3/76(H3N2))，D00716(A/sw/Hong Kong/4/76(H3N2))，AB101674(A/Hong Kong/1/68(H3N2))，CY009302(A/Swine/Colorado/1/7

6、7(H3N2))的核苷酸同源性為87.7～91.3％，氨基酸同源性為87.4～91.7％。系統(tǒng)發(fā)育分析表明本實驗所分離的3個SIV毒株均屬于N2亞型，與H1N2亞型毒株親緣性最相近，特別與中國海南毒株EF566204(A/swine/Hainan/1/05(H1N2))，以及中國廣西毒株EF556202(A/swine/Guangxi/17/05(H1N2))與EF556200(A/wine/Guangxi/13/06(H1N2))毒株