透明顫菌血紅蛋白VHb基因的玉米遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、澇害是制約作物生產(chǎn)的最主要環(huán)境因子之一,它嚴(yán)重影響農(nóng)作物的產(chǎn)量和栽培范圍,解決這個問題的有效途徑之一是培育耐漬作物品種。已知透明顫菌血紅蛋白VHb基因在缺氧環(huán)境條件下能合成血紅蛋白,提高植物抵抗?jié)澈Φ哪芰?。因?將透明顫菌血紅蛋白VHb基因轉(zhuǎn)入玉米,為玉米耐漬育種提供新的種質(zhì)資源,有助于我國耐漬轉(zhuǎn)基因玉米的開發(fā)和產(chǎn)業(yè)化研究。本研究以A188xB73雜交種F2為材料,利用基因槍轟擊將VHb基因?qū)肱咝杂鷤M織。其主要研究結(jié)果包括:

2、　　 1.轉(zhuǎn)基因再生幼苗根系的誘導(dǎo)受培養(yǎng)基影響,不同培養(yǎng)基類型,對再生苗的成活率、根長、葉長、葉片數(shù)、苗高等性狀的影響存在很大差異。1／2MS(Murashigeand Skoog medium,MS培養(yǎng)基)+0.3mg／LNAA(Naphthy Acetic Acid,萘乙酸)移栽成活率最高,達(dá)到75％,根系發(fā)達(dá)、植株健壯；1／2MS成活率最低,僅為33％,而且根系生長纖細(xì),生根量少。生根培養(yǎng)時,1／2MS培養(yǎng)基+0.3mg／LNA

3、A可以促進再生芽生根,并可增加生根數(shù)量,為較合適的生根培養(yǎng)基。
　　 2.以bar基因作為篩選標(biāo)記,經(jīng)過3輪篩選獲得31塊抗性愈傷組織,其中經(jīng)GUS活性檢測有29塊抗性愈傷組織呈藍(lán)色；T0代獲得轉(zhuǎn)基因植株94株,其中54株為PCR陽性植株,占抗性植株總數(shù)的57.4％,最終有5株陽性植株結(jié)實。進一步對PCR鑒定為陽性植株的玉米葉片進行RT-PCR檢測,得到10株轉(zhuǎn)基因植株中有7株呈陽性,證明VHb己整合到玉米基因組中,而且部分轉(zhuǎn)基

4、因植株在轉(zhuǎn)錄水平得到了表達(dá)。
　　 3.通過對轉(zhuǎn)基因植株的田間觀察和I-KI花粉染色檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株不同事件中均出現(xiàn)不育株；同一事件中的轉(zhuǎn)基因陽性與陰性植株數(shù)量差異不明顯,PCR檢測呈陽性和陰性的植株都有可育株和不育株。證明再生植株后代中出現(xiàn)的不育變異與組織培養(yǎng)過程有關(guān),屬于體細(xì)胞克隆變異。
　　 4.對T1代轉(zhuǎn)基因植株進行PCR檢測,其中11株是陽性,26株是陰性植株,陽性率為29.73％,證明VHB基因己經(jīng)初