表達透明顫菌血紅蛋白基因?qū)︶劸平湍腹こ叹铣勺纤牖?4，11-二烯的影響.pdf

1、青蒿素是一種具有獨特結(jié)構(gòu)的新型抗瘧藥,藥物需求很大。近年來青蒿素合成生物學研究進展迅速。青蒿素的直接前體青蒿酸生物合成途徑已基本明確,參與青蒿酸生物合成的酶基因都已經(jīng)被克隆并進行了功能鑒定。將青蒿素生物合成相關(guān)基因?qū)胛⑸飶亩a(chǎn)青蒿酸是近年來的研究熱點,但通過微生物生產(chǎn)青蒿酸的產(chǎn)量目前還未達到工業(yè)化生產(chǎn)的標準。對條件進行優(yōu)化從而獲得高產(chǎn)青蒿酸的菌株意義重大。
　　 透明顫菌血紅蛋白能夠在低氧條件下促進細胞生長,提高蛋白質(zhì)的合

2、成,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于高度耗氧的微生物發(fā)酵。
　　 本研究利用合成生物學技術(shù)將透明顫菌血紅蛋白基因?qū)脶劸平湍腹こ叹?開展了制備青蒿素前體紫穗槐-4,11-二烯研究。通過連續(xù)重疊PCR技術(shù)合成透明顫菌血紅蛋白基因Vgb及其酵母偏愛性突變基因Vgbm,并構(gòu)建了相應(yīng)的酵母表達載體pYeDP60/G/Vgb和pYeDP60/G/Vgbm,用醋酸鋰介導(dǎo)的方法將其分別導(dǎo)入含整合紫穗槐-4,11-二烯合酶基因的釀酒酵母WK1中,得到相應(yīng)的酵

3、母工程菌WK1-Vgb和WK1-Vgbm。對酵母工程菌WK1、WK1-Vgb和WK1-Vgbm進行了發(fā)酵培養(yǎng),測定了它們的生長量,并用GC-MS分析了工程菌發(fā)酵產(chǎn)物中紫穗槐-4,11-二烯。結(jié)果表明,透明顫菌血紅蛋白基因?qū)湍腹こ叹纳L有一定的促進作用,但顯著促進紫穗槐-4,11-二烯的合成,從而顯著提高了紫穗槐-4,11-二烯的產(chǎn)量。與對照工程菌WK1相比,工程菌WK1-Vgb和工程菌WK1-Vgbm的紫穗槐-4,11-二烯產(chǎn)量分別