人血紅蛋白片段分離純化和血紅蛋白抗大腸埃希菌陰道感染研究.pdf

1、本文旨在分離人血紅蛋白及其片段，進(jìn)行體外抗菌活性檢測(cè)和比較，并對(duì)血紅蛋白抗大腸埃希菌陰道感染作用進(jìn)行初步探討，為血紅蛋白將來(lái)的應(yīng)用打下基礎(chǔ)。本文分為兩部分： 第一部分：人血紅蛋白片段分離純化及體外抗菌活性比較。 目的：分離純化成人血紅蛋白肽鏈片段及比較其體外抗菌活性。 方法：取志愿者新鮮外周血或庫(kù)存血，二氯甲烷裂解紅細(xì)胞，差速離心分離血紅蛋白；利用陽(yáng)離子交換及分子篩分離血紅蛋白α、β鏈；溴化氰化學(xué)法裂解血紅蛋白肽

2、鏈，反相高效液相色譜技術(shù)純化其片段。Tricine SDS-PAGE檢測(cè)各分離階段目的分子的純度、分子量；瓊脂糖彌散法抑菌試驗(yàn)檢測(cè)得到的血紅蛋白及其片段的抑菌活性。 結(jié)果：血液差速離心分離的血紅蛋白經(jīng)層析得到α鏈和β鏈；溴化氰裂解、反相高效液相色譜制備了α鏈的α1～32(約3KD)、α77～141(約7 KD)兩個(gè)片段；β鏈的β 56～146(約10KD)一個(gè)片段。除α1～32外，血紅蛋白、α鏈、β鏈、及α77～141對(duì)革蘭陰性

3、菌大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC25922和臨床分離株54080有強(qiáng)的抑菌作用，而對(duì)銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC 27853和銅綠假單胞菌臨床分離株P(guān)AO1以及革蘭陽(yáng)性菌金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC25923、真菌白色念株菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC10231無(wú)抑菌作用，而α56～146不僅對(duì)所選大腸埃希菌有強(qiáng)抗菌作用外，而且對(duì)銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌有弱的抑菌作用，但對(duì)白色念株菌無(wú)抑菌作用。 結(jié)論：血紅蛋白、α/β鏈及其片段有抑菌作用，但其主

4、要針對(duì)的是革蘭陰性菌大腸埃希菌；而且除α1～32的抑菌作用較弱外，血紅蛋白、α/β鏈及其片段三者抑菌活性比較，其效能基本相似。 第二部分：人血紅蛋白抗大鼠大腸埃希菌陰道感染研究。 目的：檢測(cè)人血紅蛋白在體內(nèi)的抗感染作用。 方法：手術(shù)切除大鼠雙側(cè)卵巢，皮下注射苯甲酸雌二醇建立和維持動(dòng)情期，氫化可的松琥珀酸鈉造成大鼠全身免疫力低下，PBS反復(fù)沖洗大鼠陰道后將大腸埃希菌臨床分離株接種到大鼠陰道內(nèi)。感染成功后設(shè)立實(shí)驗(yàn)組和

5、對(duì)照組，采用陰道給血紅蛋白，觀察子宮宮頸陰道臟器指數(shù)和組織病理切片檢測(cè)血紅蛋白治療前后各組指標(biāo)變化。 結(jié)果：子宮宮頸陰道臟器指數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析示血紅蛋白組(實(shí)驗(yàn)組)、空白對(duì)照組間無(wú)差異(P>0.05)，基質(zhì)對(duì)照組(感染后不治療)與前兩組比均有顯著性差異(P<0.05)，基質(zhì)對(duì)照組的臟器指數(shù)增加明顯；血紅蛋白組的炎癥減輕程度為57％，與基質(zhì)對(duì)照組對(duì)比統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異。 結(jié)論：血紅蛋白不僅具有體外的抑菌功能，而且在體內(nèi)能夠