Gal4-UAS轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)表達(dá)BmKIT3R對(duì)家蠶蛹期發(fā)育的影響.pdf

1、家蠶（Bombyx mori Linnaeus）的蛹期在實(shí)際生產(chǎn)生活中，一般維持在兩周左右，但是通過(guò)延長(zhǎng)蛹期，可以節(jié)約大量花費(fèi)在鮮繭加工過(guò)程中的人力物力。本文旨在利用Gal4/UAS酵母雙雜交系統(tǒng)，蛹期特異性表達(dá)啟動(dòng)子介導(dǎo)，控制東亞鉗蝎毒素基因（BmKIT3R，Chinese scorpion Buthus martensii Karsch）特異性地在家蠶蛹期表達(dá)。Gal4蛋白由蛹期特異性表達(dá)啟動(dòng)子，家蠶翅原基細(xì)胞蛋白BmWCP4(B.

2、mori wing-cuticle protein gene)或家蠶溶繭酶PDP(B.mori cocoonase gene)控制；BmKIT3R基因由可以被Gal4蛋白特異性識(shí)別的UAS(cis-acting element)序列控制表達(dá)，雙元系統(tǒng)的激活系統(tǒng)和效應(yīng)系統(tǒng)都裝載在piggBac轉(zhuǎn)座子載體上。piggyBac載體中含有由家蠶多角體病毒BmNPV ie-1（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus im

3、mediate-early gene）極早期基因啟動(dòng)子控制的新霉素抗性基因（neomycin-resistance gene，neo），以及家蠶A3(B. mori actin3)基因啟動(dòng)子控制的綠色熒光蛋白基因（green fluorescent protein gene，gfp）。載體被精子介導(dǎo)法導(dǎo)入家蠶受精卵，經(jīng)綠色熒光蛋白觀察和G418篩選，制得轉(zhuǎn)基因家蠶。經(jīng)傳代后提取家蠶基因組，用PCR驗(yàn)證家蠶基因組中存在gfp與neo基因。

4、雙元系統(tǒng)雜交種的幼蟲(chóng)與對(duì)照組Gal4ˉ和UASˉ的種系相同，并無(wú)發(fā)育滯緩的情況，而在蛹期，前者因雙元系統(tǒng)控制的BmKIT3R基因的表達(dá)，有些在蛹期死亡，有些蛹期發(fā)育遲緩，而對(duì)照組正常發(fā)育化蛾。并且，在Gal4/UAS雙元系統(tǒng)中，BmWCP4的啟動(dòng)效果在試驗(yàn)中優(yōu)于PDP的啟動(dòng)效果。雙元系統(tǒng)雜交種UAS-BmKIT3R(3-247)×BmWCP4-Gal4(大造),UAS-BmKIT3R(3-247)×PDP-Gal4(3-166)和UAS