海島棉遺傳轉(zhuǎn)化體系及轉(zhuǎn)NAC6基因的研究.pdf

1、本研究通過誘導不同基因型海島棉下胚軸的體細胞胚胎發(fā)生,以新海16號、新海24號、新海30號胚性愈傷組織為受體材料,進一步優(yōu)化海島棉遺傳轉(zhuǎn)化體系,通過農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化NAC轉(zhuǎn)錄子家族,獲得轉(zhuǎn)基因再生植株T0代,使用PEG6000(簡稱PEG)對棉花的體細胞胚胎進行滲透脅迫,研究體細胞胚胎對不同濃度PEG脅迫的敏感性,研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　利用本實驗室已經(jīng)建立的棉花再生體系,同時以陸地棉為基礎(chǔ)比較海島棉再生植株和非再生植株在誘導愈

2、傷組織時期、愈傷組織分化時期、體細胞胚胎時期的出愈數(shù)量、出愈時間,進一步確定再生植株比非再生植株在體細胞發(fā)生方面的優(yōu)越性。結(jié)果表明再生植株比非再生植株在各個時期的時間縮短了30d左右。
　　以3個栽培海島棉品種新海30、新海24、新海16誘導而來的胚性愈傷組織為受體材料,采用方差分析的方法研究不同菌種和質(zhì)粒對本實驗室已建立的農(nóng)桿菌介導海島棉外源基因轉(zhuǎn)化體系的影響。研究結(jié)果表明:菌種和質(zhì)粒對轉(zhuǎn)化率有極其顯著的影響,而兩者之間的互作關(guān)

3、系也比較顯著。最終得到農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化海島棉胚性愈傷組織的最佳菌種和質(zhì)粒是:GV3101和pBI121。本研究結(jié)果將有助于改進和完善海島棉胚性愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　通過PEG6000脅迫胚性愈傷組織,研究不同濃度PEG6000脅迫下胚性愈傷組織的誘導率,得出耐旱水平變化情況,通過測定超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)等的活性來鑒定轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因海島棉的耐旱性。結(jié)果表明:PEG6000的濃度為10％時,轉(zhuǎn)NAC6基