紫花苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及轉(zhuǎn)MsCP1基因植株的獲得.pdf

1、土壤鹽漬化嚴重威脅著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)環(huán)境。培育農(nóng)作物抗鹽堿品種，提高作物本身的耐鹽能力是改良利用鹽堿地經(jīng)濟而有效的方法。苜蓿(MedicagosativaL.)是比較耐鹽的多年生豆科牧草，適宜在輕度鹽堿地種植，同時其還具有營養(yǎng)價值高、適口性好等特點。培育耐鹽苜蓿品種，提高其耐鹽性，不但能提高鹽堿地利用率，改良鹽堿地，還可以增加優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料，為鹽堿地區(qū)發(fā)展畜牧業(yè)奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。 本研究以紫花苜?！爸熊?號”為材料，建立了紫花苜蓿高頻

2、再生組織培養(yǎng)體系并優(yōu)化了轉(zhuǎn)化體系。在此基礎(chǔ)上，將從“中苜1號”中克隆所得的與耐鹽相關(guān)的半胱氨酸蛋白酶基因MsCP1(MedicagosativaL.cysteineprotease)通過農(nóng)桿菌的介導，再次轉(zhuǎn)化“中苜1號”，以期望獲得耐鹽性更好的苜蓿品種。初步鑒定表明表達元件有可能已經(jīng)整合到苜蓿基因組中。主要結(jié)果如下： 1.建立了“中苜1號”體胚發(fā)生再生體系。通過不同處理結(jié)果的比較表明，子葉較下胚軸更適于作為再生受體材料；UM培養(yǎng)

3、基誘導胚性愈傷組織效果較好；UMO培養(yǎng)基對胚狀體的誘導、芽的生長和再生植株的生根最為有效。 2.建立并優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化體系。通過對試驗現(xiàn)象的觀察和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析表明，將培養(yǎng)5～7天的苜蓿無菌苗的子葉經(jīng)UM培養(yǎng)基重懸至濃度為OD600=0.6左右的菌液浸染10分鐘，共培養(yǎng)3天，然后轉(zhuǎn)接到含450mg/L的頭孢霉素和30mg/L的潮霉素的UM培養(yǎng)基上進行篩選培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化體系效果最佳。 3.目的基因MsCP1的轉(zhuǎn)化及對