海島棉再生體系的建立及SATI基因遺傳轉(zhuǎn)化初步研究.pdf

1、本研究通過下胚軸的體細(xì)胞胚胎發(fā)生建立了海島棉的植株再生體系；并以新海16胚性愈傷組織為受體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行了SATI基因的遺傳轉(zhuǎn)化，獲得了轉(zhuǎn)基因再生植株。為今后的海島棉分子改良奠定了基礎(chǔ)。本研究取得的主要結(jié)果如下： 1.海島棉愈傷誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為，MSB添加0.1mg/LKT及0.1mg/L2，4-D，愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)95％以上。質(zhì)地疏松愈傷組織分化的最適條件為，1/3MSB培養(yǎng)基可使60％以上的愈傷組織分化，質(zhì)地緊密愈傷

2、組織最佳分化培養(yǎng)基為MSB，分化率為20％左右。MSB培養(yǎng)基中胚性愈傷組織擴(kuò)繁的最適條件為，將MSB中KNO3濃度增加兩倍同時(shí)添加0.01mg/LKT、0.3mg/LNAA。 2.體細(xì)胞胚形態(tài)建成的最適條件為： MSB中KNO3加倍并添加2.0g/L凝固劑gelrite、0.1g/L天冬酰胺、0.1g/L谷氨酰胺及0.05mg/L IBA，其中10％體細(xì)胞胚胎可分化出形態(tài)建成完整的幼苗，培養(yǎng)周期為6-7個(gè)月。 3.農(nóng)桿菌

3、介導(dǎo)海島棉新海16的胚性愈傷組織，獲得轉(zhuǎn)尉SATI基因的轉(zhuǎn)基因植株。轉(zhuǎn)化條件為：新海16胚性愈傷組織預(yù)處理10d后，于OD值為0.3-0.5的菌液中浸泡10min后共培養(yǎng)24h。處理完畢后，將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)入添加50mg/Lkan及200mg/L頭孢霉素的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞胚胎分化，可獲得15％左右的轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞胚胎，其中5％可獲得正常再生植株。通過PCR檢測初步篩選轉(zhuǎn)基因植株，陽性率為19％，將陽性植株嫁接，成活率達(dá)到90％以上