版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、硬蜱是一類可寄生于多種溫血?jiǎng)游?包括人)的體外寄生蟲(chóng)。宿主的血液是硬蜱唯一的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。由于硬蜱具有叮咬時(shí)間較長(zhǎng),吸血量較多以及可多次反復(fù)叮咬等特點(diǎn),因此被硬蜱叮咬過(guò)的家畜可表現(xiàn)為被毛散落,叮咬處皮膚出現(xiàn)潰、壞死、情緒躁動(dòng)、食欲不振等癥狀;除了以上直接危害之外,硬蜱還可傳播多種病原如細(xì)菌、病毒、原蟲(chóng)、立克次氏體等從而造成人和動(dòng)物患病。
硬蜱生活史較為復(fù)雜,所以國(guó)內(nèi)外學(xué)者多致力于硬蜱生物學(xué)特性的研究。目前全球氣候變暖給硬蜱以及
2、蜱傳病造成了巨大的影響。氣溫升高不僅擴(kuò)大了硬蜱的分布范圍而且促進(jìn)了蜱傳疾病的流行。盡管國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)蜱的分類、生物學(xué)特性等進(jìn)行了大量的研究,但有關(guān)溫度對(duì)硬蜱生物學(xué)特性影響的分子機(jī)制研究很少。半胱氨酸蛋白酶是國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的一種新型抗蜱候選分子,同時(shí)也是重要的代謝酶,因此本研究對(duì)三種硬蜱體內(nèi)半胱氨酸蛋白酶的活性和溫度之間的關(guān)系做了詳細(xì)的探討。
研究首先對(duì)三種硬蜱體內(nèi)半胱氨酸蛋白酶保守型片段進(jìn)行克隆及同源性分析,之后對(duì)微小扇頭蜱
3、體內(nèi)半胱氨酸蛋白酶進(jìn)行原核表達(dá)并分析其體外活性;在確定了實(shí)驗(yàn)室條件下硬蜱適宜的飼養(yǎng)溫度后,分析溫度變化對(duì)三種硬蜱體內(nèi)半胱氨酸蛋白酶活性的影響。
1)三種硬蜱半胱氨酸蛋白酶保守序列的獲取
以微小扇頭蜱、亞?wèn)|璃眼蜱、鐮形扇頭蜱cDNA序列為模板,利用半胱氨酸蛋白酶核苷酸序列保守性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增和克隆。測(cè)序結(jié)果表明三種硬蜱所得基因片段均含保守區(qū)域并且與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中扇頭蜱屬,革蜱屬的半胱氨酸蛋白酶基因序列的同
4、源性高于80%;與血蜱屬的半胱氨酸蛋白酶基因序列的同源性高于70%。
2)微小扇頭蜱半胱氨酸蛋白酶全長(zhǎng)序列的克隆、表達(dá)以及活性檢測(cè)
設(shè)計(jì)微小扇頭蜱半胱氨酸蛋白酶全長(zhǎng)引物,克隆其ORF,構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-28a-cys后在大腸桿菌BL21中進(jìn)行原核表達(dá),對(duì)自我激活后的重組蛋白進(jìn)行活性檢測(cè)。結(jié)果顯示微小扇頭蜱半胱氨酸蛋白酶基因全長(zhǎng)1041bp,編碼332個(gè)氨基酸,和已報(bào)道的微小扇頭蜱半胱氨酸蛋白酶基因序列有
5、98%的同源性。只有在酸性條件下自我激活的重組蛋白才可發(fā)揮其水解底物的活性。
3)硬蜱適宜生長(zhǎng)溫度的確定
在實(shí)驗(yàn)室條件下設(shè)定22℃、28℃、37℃三個(gè)溫度級(jí),分別飼養(yǎng)鐮形扇頭蜱和亞?wèn)|璃眼蜱,觀察不同溫度下各硬蜱各發(fā)育階段的生物學(xué)特性差異。結(jié)果顯示兩種硬蜱幼蜱、若蜱蛻皮率以及卵的孵化率均在28℃時(shí)表現(xiàn)為最佳。
4)溫度差異對(duì)于三種硬蜱半胱氨酸蛋白酶活性的影響
選擇24℃、28℃、32
6、℃三個(gè)溫度級(jí),分別飼養(yǎng)三種硬蜱,提取三組硬蜱各發(fā)育階段飼養(yǎng)1d、3d、5d的體內(nèi)半胱氨酸蛋白酶,分別比較各組蛋白酶水解特異性底物的活性。結(jié)果顯示溫度和半胱氨酸蛋白酶活性有關(guān),在24℃-32℃范圍內(nèi),隨著溫度的升高,同一天內(nèi)幼蜱和若蜱體內(nèi)的半胱氨酸蛋白酶的活性逐漸降低,因此溫度上升提高了其在硬蜱一定發(fā)育階段體內(nèi)的代謝速度,即加速其在硬蜱體內(nèi)的利用。
本研究所獲得的結(jié)果,在全球氣候變暖趨勢(shì)下給蜱以及蜱傳病的防控提供了重要的理論
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 中國(guó)明對(duì)蝦絲氨酸蛋白酶、活性氧的產(chǎn)生與消除及其半胱氨酸蛋白酶研究.pdf
- 廣州管圓線蟲(chóng)三種半胱氨酸蛋白酶在其各期蟲(chóng)體中的免疫熒光定位.pdf
- 半胱氨酸蛋白酶IdeS的原核表達(dá)、純化、活性鑒定及應(yīng)用.pdf
- 半胱氨酸蛋白酶抑制劑C測(cè)定的檢驗(yàn)程序驗(yàn)證及三種測(cè)定方法比較.pdf
- 水稻半胱氨酸蛋白酶OsCP2的功能研究.pdf
- 殘緣璃眼蜱subolesin和半胱氨酸蛋白酶基因生物學(xué)功能初步研究.pdf
- 人半胱氨酸蛋白酶抑制劑ccysc酶聯(lián)免疫分析
- 靶向半胱氨酸組織蛋白酶家族的溶酶體探針的研究.pdf
- 家蠅3種半胱氨酸蛋白酶抑制劑的鑒定與功能分析.pdf
- 水稻半胱氨酸蛋白酶抑制劑基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)的研究.pdf
- 棉鈴蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶的性質(zhì)及抑制因子研究.pdf
- 豬囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的表達(dá).pdf
- 棉鈴蟲(chóng)半胱氨酸蛋白酶組織分布、合成部位的研究.pdf
- 半胱氨酸蛋白酶抑制劑C與冠心病的關(guān)系.pdf
- 大豆半胱氨酸蛋白酶基因GmCASc的克隆及初步功能分析.pdf
- 大黃魚(yú)半胱氨酸蛋白酶抑制劑(Cystatin)的活性、功能及應(yīng)用的研究.pdf
- 桑樹(shù)轉(zhuǎn)水稻半胱氨酸蛋白酶抑制劑(Oryzacystatin)基因的研究.pdf
- 同型半胱氨酸對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的影響.pdf
- 鐮形扇頭蜱半胱氨酸蛋白酶的鑒定及其在唾液腺細(xì)胞凋亡中的作用研究.pdf
- 水母半胱氨酸蛋白酶抑制劑cDNA在轉(zhuǎn)基因煙草中的表達(dá)及活性分析.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論