FAD2基因表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化南瓜的研究.pdf

1、籽用南瓜營(yíng)養(yǎng)豐富，是人們理想的食療保健佳品，其富含油脂和蛋白質(zhì)，其中油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸，易于被人體吸收。南瓜籽粒油脂的品質(zhì)是由脂肪酸的含量和組成決定的，而不同南瓜品種間的種子含油量和脂肪酸組成存在很大差異。這說(shuō)明不同南瓜品種的脂肪酸積累在遺傳上是有差異的，這種差異與脂肪酸代謝相關(guān)基因是相關(guān)的。因此，研究籽用南瓜種子中與脂肪酸的代謝相關(guān)的基因的功能，對(duì)于改良南瓜籽的品質(zhì)和進(jìn)行南瓜品質(zhì)育種具有重要的理論意義。
　　 油酰磷脂

2、酰膽堿去飽和酶(FAD2)是植物體中一個(gè)催化多不飽和脂肪酸形成比較重要的酶，主要催化油酸(18:1)向亞油酸(18:2)的轉(zhuǎn)化，是決定植物種子中油酸和亞油酸含量多少的最關(guān)鍵酶。FAD2基因是FAD2酶的編碼基因，在南瓜中已成功克隆到該基因。FAD2酶對(duì)植物體內(nèi)的脂肪酸含量具有明顯的調(diào)控作用，F(xiàn)AD2基因正義表達(dá)能提高亞油酸和其他多不飽和脂肪酸的含量，反義表達(dá)能提高油酸含量。因此，可以通過(guò)基因工程手段來(lái)驗(yàn)證南瓜種子中FAD2基因的功能。<

3、br>　　 子房注射法是一種育種工作中經(jīng)常使用的植物轉(zhuǎn)基因方法。此法有效地利用了植物自然生殖過(guò)程，無(wú)需進(jìn)行細(xì)胞或原生質(zhì)體的組織培養(yǎng)，可以直接得到轉(zhuǎn)化種子，有效的縮短了育種周期；而且所用的儀器設(shè)備簡(jiǎn)單便宜，在田間或溫室即可進(jìn)行，是一種較為簡(jiǎn)捷而有效的手段。因此。本試驗(yàn)利用子房注射法將FAD2基因?qū)肽瞎希谕@得南瓜轉(zhuǎn)基因植株，為分子育種提供了一條新的、更有效的途徑。同時(shí)，也為驗(yàn)證南瓜種子中FAD2基因的功能和南瓜品質(zhì)育種奠定了基礎(chǔ)。主

4、要研究結(jié)果如下：
　　 1.構(gòu)建植物表達(dá)載體pCMBIA2300-NAPIN-FAD2質(zhì)粒
　　 通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得甘藍(lán)型油菜種子特異性表達(dá)的啟動(dòng)子NAPIN基因(1147bp)和油酸脫飽和酶基因(FAD2)，以植物表達(dá)載體pCMBIA2300+標(biāo)載體，通過(guò)酶切、連接、篩選、鑒定等操作構(gòu)建了植物表達(dá)載體pCMBIA2300-NAPIN-FAD2。
　　 2.探索出適于南瓜的子房注射體系
　　 通過(guò)花粉管的