種子特異表達(dá)ipt基因載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化辣椒的研究.pdf

1、Y90157z單位代碼10635學(xué)號(hào)s2003669西南大學(xué)碩士學(xué)位論文種子特異表達(dá)枷基因載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化辣椒的研究論文作者：指導(dǎo)教師：學(xué)科專業(yè)：研究方向：提交論文日期：論文答辯日期：學(xué)位授予單位：周蕾高峰教授植物學(xué)植物分子生物學(xué)2006年5月20日2006年6月10目西南大學(xué)中國(guó)重慶2006年5月極顯著的效應(yīng)，BA有顯著效應(yīng)，而IAA各水平間的著異未達(dá)到顯著水平。結(jié)果表明，芽誘導(dǎo)的辣椒最佳基因型為“慶椒一號(hào)”，其子葉柄的芽誘導(dǎo)率可達(dá)9

2、778％。不同的苗齡對(duì)芽誘導(dǎo)也有影響，10天齡實(shí)生曲的芽誘導(dǎo)最高。于葉放置方式對(duì)不定芽誘導(dǎo)也有影響，子葉近軸面朝上放置方式的芽誘導(dǎo)率明顯高于其近軸面朝下。辣椒芽再生的瓶頸在丁芽的伸K，在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)出的不定芽，無(wú)明顯的莖葉芽的結(jié)構(gòu)。因此，還需要調(diào)整培養(yǎng)基的激素配比來(lái)誘導(dǎo)辣椒叢生芽的伸長(zhǎng)。正交試驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)基中添加的1AA、BA和GA3對(duì)辣椒芽伸長(zhǎng)均有顯著性效應(yīng)，最佳伸長(zhǎng)培養(yǎng)基為MB05mg／LIAA30mg／LBA10mg／L

3、GA3。同時(shí)，優(yōu)化了辣椒不定芽的生根培養(yǎng)基，最佳生根培養(yǎng)基為1／2MS05m扎IAA。另外常規(guī)的辣椒子葉再生體系一直存在著不定芽仲長(zhǎng)困難的問(wèn)題因此根據(jù)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道，建立了簡(jiǎn)便有效的鳥(niǎo)喙形外植體組織再生體系。采用苗齡為12天的“慶椒～號(hào)”辣椒實(shí)生苗，切去頂芽、腋芽和一邊的子葉后，置于不添加任何激素的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其不定芽均可以正常伸長(zhǎng)，再生率可達(dá)90％。3辣椒遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立通過(guò)外植體對(duì)Kan敏感性試驗(yàn)，確定辣椒子葉再生培養(yǎng)基中Ka

4、n的選擇濃度為45mg，L，生根培養(yǎng)基中Kan的選擇濃度為15mg，L。預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)均能促進(jìn)感染后子葉抗性芽的再生，經(jīng)過(guò)預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)，其抗性芽再生率高于未經(jīng)預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)5167個(gè)百分點(diǎn)。農(nóng)桿菌浸染時(shí)間對(duì)于Ⅱ1抗性芽再生有較大影響，其最佳浸染時(shí)間為10分鐘，抗性芽再生率達(dá)5139％。綜合上述試驗(yàn)，確定將子葉外植體預(yù)培養(yǎng)2天后，片1LBA4404菌液浸染10分鐘，共培養(yǎng)2天，再置于選擇培養(yǎng)基(MB05mg，L1AA50mg／LBA45

5、mg／LKan500mg／LCarb)中培養(yǎng)30天，將有芽再生的外植體置于芽選擇伸長(zhǎng)培養(yǎng)基(MBo5mg／LIAA30m∥LBA10mg／LGA345me／LKan500mg／LCarb)中繼續(xù)培養(yǎng)20天生根。4辣椒轉(zhuǎn)基因植株的鑒定Jcitrin啟動(dòng)于：：GUS融合基因轉(zhuǎn)化辣椒的抗性芽能正常生根。分別對(duì)獲得的Jcitrin啟動(dòng)子：：GUS融合基因所轉(zhuǎn)化的再生抗性植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有4株植株能擴(kuò)增出明顯的大小約為700bp的特