幾種蟲生菌、食用菌和植物病原真菌代謝組差異比較研究.pdf

1、蟲生菌主要指子囊菌亞門中蟲草屬真菌及其確知的無性型，由于其獨(dú)特的殺蟲作用，以及其和昆蟲的長期協(xié)同進(jìn)化的作用，使得它們不僅是重要的生物防治材料，同時(shí)還是寶貴的藥用資源。為探討蟲生菌的代謝特點(diǎn)，本研究對(duì)蟲生菌中白僵菌屬、綠僵菌屬、棒束孢屬的部分菌株與常見的幾種食用菌和植物病原真菌的固體發(fā)酵菌絲體的代謝物進(jìn)行了系統(tǒng)性比較研究，具體內(nèi)容包括：幾種蟲生菌、食用菌、植物病原真菌菌絲體甲醇和乙酸乙酯提取物的薄層色譜比較；幾種蟲生菌、食用菌、植物病原真

2、菌菌絲體甲醇和乙酸乙酯提取物的清除自由基活性的定性定量比較；幾種蟲生菌、食用菌、植物病原真菌菌絲體甲醇和乙酸乙酯混合提取物中常見成分甘露醇、腺苷、蟲草素、麥角甾醇的HPLC-MS分析比較；基于HPLC-MS的代謝組學(xué)對(duì)幾種蟲生菌、食用菌、植物病原真菌菌絲體甲醇和乙酸乙酯混合提取物的分析。
　　 幾種蟲生菌、食用菌、植物病原真菌菌絲體甲醇提取物和乙酸乙酯提取物的TLC結(jié)果顯示，在254nm紫外下，綠色綠僵菌、金龜子綠僵菌、雙型綠僵

3、菌、姬松茸、香菇、杏鮑菇、灰樹花、平菇、金針菇、蝙蝠蛾擬青霉、蛹擬青霉、玫煙色棒束孢、淡紫棒束孢、斜鏈棒束孢、環(huán)鏈棒束孢、蟬棒束孢、布氏白僵菌、中國白僵菌、球孢白僵菌、粉紅單端孢、青霉、辣椒灰霉都含有含量不同的腺昔；黃綠綠僵菌、金龜子綠僵菌、灰樹花、平菇、蛹擬青霉、古擬擬青霉、環(huán)鏈棒束孢、球孢白僵菌、青霉都含有含量不同的蟲草素。在Rf值為0.25處玫煙色棒束孢、粉棒束孢、細(xì)腳棒束孢、斜鏈棒束孢、蟬棒束孢、布氏白僵菌、蘇格蘭白僵菌、多形白

4、僵菌、中國白僵菌、假球孢白僵菌、球孢白僵菌、粉紅單端孢、青霉都有相似的條帶。而15％硫酸試劑顯色結(jié)果表明，供試的32個(gè)菌株在Rf為0.18、0.34(甘露醇)、0.54、0.93、0.96(麥角甾醇)處具有相同的物質(zhì)，但是斑點(diǎn)顏色的深淺不同，這表明蟲生菌、食用菌和植物病原菌之間具有相同的物質(zhì)，另外，這些物質(zhì)在不同菌株中含量也是不同的；供試的所有菌株的TLC圖譜都存在明顯的種間差異；不同種屬的菌株沒有相似的圖譜。
　　 幾種蟲生菌

5、、食用菌、植物病原真菌菌絲體甲醇提取物和乙酸乙酯提取物的自由基清除活性的定性、定量比較發(fā)現(xiàn)，供試的32個(gè)菌株的菌絲體甲醇提取物和乙酸乙酯提取物都有一定的自由基清除活性，但是相比之下，甲醇提取物普遍具有自由基清除活性，且自由基清除活性的成分比較多。不同種屬的樣品自由基清除的活性成分以Rf值0.2以下的極性較大的化合物和Rf值0.84以及麥角甾醇為主，而Rf值0.84處的組分在蟲生菌、食用菌、植物病原真菌中都存在。另外，清除DPPH自由基活

6、性的定量比較結(jié)果表明，蟲生菌中的自由基清除率明顯高于食用菌和植物病原真菌。
　　 采用HPLC-MS以及結(jié)合TLC方法對(duì)幾種蟲生菌、食用菌、植物病原真菌菌絲體的甲醇和乙酸乙酯混合提取物中甘露醇、腺苷、蟲草素、麥角甾醇進(jìn)行了分析，結(jié)果表明所有供試菌株都含有甘露醇(除灰樹花)和麥角甾醇；蘇格蘭白僵菌、假球孢白僵菌、戴氏綠僵菌、粉棒束孢、細(xì)腳棒束孢的總離子流圖譜中沒有與腺苷的峰對(duì)應(yīng)的物質(zhì)；多形白僵菌、布氏白僵菌、蘇格蘭白僵菌、中國白僵

7、菌、假球孢白僵菌、柱孢綠僵菌、戴氏綠僵菌、雙型孢綠僵菌、斜鏈棒束孢、粉棒束孢、玫煙色棒束孢、細(xì)腳棒束孢、蝙蝠蛾擬青霉、麥軸梗孢、辣椒灰霉的總離子流圖譜中沒有與蟲草素的峰對(duì)應(yīng)的物質(zhì)。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)常見的幾種食用菌及植物病原真菌里的辣椒灰霉、青霉、粉紅單端孢、麥軸梗孢也含有腺苷成分；灰樹花、杏鮑菇、金針菇、平菇、姬松茸、青霉、粉紅單端孢以及部分蟲生菌含有蟲草素，但是在食用菌中及青霉、粉紅單端孢中尚屬于首次發(fā)現(xiàn)。
　　 利用基于HPLC

8、-MS-鞠代謝組學(xué)方法對(duì)白僵菌、綠僵菌與棒束孢菌絲體的甲醇和乙酸乙酯混合提取物研究發(fā)現(xiàn)，白僵菌、綠僵菌與棒束孢在Dendrogram中綠僵菌與棒束孢先聚為一類，最后與白僵菌聚在一起，說明綠僵菌與棒束孢在代謝物組成上比較接近。對(duì)蟲生菌(白僵菌、綠僵菌、棒束孢)、食用菌與植物病原真菌菌絲體的甲醇和乙酸乙酯混合提取物進(jìn)行基于HPLC-MS代謝組學(xué)分析后，我們發(fā)現(xiàn)白僵菌、綠僵菌和棒柬孢中部分特有的化合物，這些化合物可能是蟲菌長期協(xié)同進(jìn)化所產(chǎn)生的