降香黃檀與多裂黃檀木材DNA提取及其rDNA-ITS序列分析.pdf

1、木材是人類(lèi)生存和發(fā)展中一種不可或缺的重要資源。在人們的生產(chǎn)、生活中，木材的保護(hù)和合理利用成為人們所關(guān)注的焦點(diǎn)。隨著時(shí)代的發(fā)展和人們生活水平的不斷提高，木制材料在生活中的應(yīng)用越來(lái)越受到人們的青睞，特別是一些高檔名貴木材制品也躋身于奢飾品行列，成為人們追求生活品質(zhì)的象征。正是由于這些珍稀名貴木材與普通木材在價(jià)格上存在巨大的差額，導(dǎo)致一些不法分子利益熏心，將一些容易混淆和不易區(qū)分的樹(shù)種以及木材制品當(dāng)做名貴珍稀樹(shù)種和木材制品進(jìn)行銷(xiāo)售，極大地?cái)_亂

2、了紅木市場(chǎng)、仿古木市場(chǎng)、古典家具市場(chǎng)和名貴樂(lè)器市場(chǎng)的正常秩序，在經(jīng)濟(jì)上和精神上給消費(fèi)者帶來(lái)了巨大的損失和打擊。因此，在木材加工、利用、使用和貿(mào)易活動(dòng)中，對(duì)木材進(jìn)行科學(xué)、快速、準(zhǔn)確的識(shí)別和鑒定顯得尤為重要和迫切。相比較傳統(tǒng)的木材識(shí)別方法而言，DNA分析是一種有效地鑒別木材的方法。
　　 本論文以不同產(chǎn)地人工林中采取的降香黃檀(DalbergiaodoriferaT.Chen)木材和多裂黃檀(DalbergiarimosaRoxb)

3、木材為研究對(duì)象，采用改良的CTAB法，PTB法(N-phenacylthiazoliumbromide)和DNA抽提試劑盒(QIAGEN)三種方法分別對(duì)不同產(chǎn)地、不同部位、不同干燥處理方式的降香黃檀以及多裂黃檀木材的DNA進(jìn)行提取、純化、5.8SrDNA和ITS序列測(cè)序，分析不同部位和不同干燥方式對(duì)降香黃檀木材DNA提取及DNA序列擴(kuò)增的影響，揭示不同產(chǎn)地降香黃檀DNA序列之間的差異以及降香黃檀和多裂黃檀DNA序列之間的差異，為利用rD

4、NA-ITS序列鑒定降香黃檀木材及其常見(jiàn)混偽品提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下：
　　 1.三種方法(改良的CTAB法，PTB法和DNA抽提試劑盒)從邊材和心材部位提取DNA濃度范圍分別為：75.95-937.38ng/μL，4.46-806.56ng/μL，其中PTB法從邊材和心材部位提取的DNA濃度都是最高的，試劑盒法提取的DNA濃度都是最低的。三種方法提取的邊材部位DNA經(jīng)純化處理后能夠滿足PCR擴(kuò)增目的片段的要求；只有PTB法

5、提取的心材部位的DNA經(jīng)純化處理后能夠滿足PCR擴(kuò)增目的片段的要求。三種方法都能夠從邊材組織中提取出DNA，PTB法更適合從心材組織中提取DNA。
　　 2.不同干燥溫度處理對(duì)降香黃檀心、邊材DNA及PCR擴(kuò)增ITS序列影響。結(jié)果表明：經(jīng)25℃和65℃溫度處理后的心、邊材基因組，凝膠電泳檢測(cè)呈現(xiàn)不同程度的彌散分布，DNA降解片段范圍分布15000bp以下，105℃干燥處理后的心、邊材基因組均降解成250bp以下的小片段。心材部分

6、經(jīng)不同溫度(25℃，65℃，105℃)干燥處理后，PCR擴(kuò)增均是失敗的，只有25℃處理后的邊材ITS序列能夠被擴(kuò)增出來(lái)。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果可推斷，PCR擴(kuò)增ITS序列失敗，是由于隨著干燥溫度的升高導(dǎo)致木材基因組DNA降解程度加劇，且都呈現(xiàn)小片段化，無(wú)法滿足PCR擴(kuò)增模板的要求。干燥溫度越高，對(duì)PCR擴(kuò)增ITS序列影響越大。
　　 3.通過(guò)使用根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已登錄的豆科黃檀屬18S、26S基因保守序列設(shè)計(jì)的特異性引物(JT

7、1-JT2)，能夠有效地避免內(nèi)生菌的干擾，成功地?cái)U(kuò)增出ITS序列。通過(guò)對(duì)PCR反應(yīng)體系的調(diào)整及優(yōu)化，最終確定了擴(kuò)增ITS序列最優(yōu)的反應(yīng)體系及參數(shù)，其中關(guān)鍵的參數(shù)和條件確定為：引物濃度為1.5μM，Mg2+濃度為2.0mM，退火溫度為56.4℃。
　　 4.通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地的降香黃檀ITS序列和降香黃檀與多裂黃檀ITS序列比較，結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地的降香黃檀和多裂黃檀ITS(包括5.8S)序列的長(zhǎng)度均為603bp，降香黃檀和多裂黃檀的