冠環(huán)屬線蟲rDNA-ITS序列分析及系統發(fā)育研究.pdf

1、寄生線蟲的種類繁多，具有消化道，以宿主的消化物、腸組織、體液或血液為生，易導致宿主出現貧血等臨床癥狀，使宿主的健康受到損害；有些種類分泌的物質對宿主的各個器官功能造成危害；其生活史復雜，病程長，會削弱人或動物的免疫力，影響宿主的生長發(fā)育甚至生殖機能；有時一種家畜體內可寄生幾種線蟲，給治療帶來困難。因此，針對不同寄生線蟲種類的調查研究十分重要，為各類線蟲病的診斷鑒別及預防控制奠定理論基礎，確保畜牧業(yè)和人類的生產生活健康發(fā)展。在國外，關于寄

2、生線蟲的分類、生活史、流行病學研究、現代分子分類鑒定及系統發(fā)育學等方面的研究已多有報道。國內對于各類寄生線蟲的形態(tài)學分類和分子分類鑒定分析也有不少，但對于圓線蟲的分子分類鑒定方面仍很欠缺。本論文首次對河南省驢體內寄生3種冠環(huán)屬圓線蟲的分子鑒定分析和系統發(fā)育進行詳細地研究。
　　本實驗以我國河南省驢體內寄生的3種冠環(huán)屬線蟲(冠狀冠環(huán)線蟲、大唇片冠環(huán)線蟲、小唇片冠環(huán)線蟲)的5個樣品為研究對象，運用保守引物NC5和NC2擴增單條蟲體rD

3、NA的內轉錄間隔區(qū)(ITS)及5.8S序列，將擴增產物回收純化、測序及序列分析。測序結果顯示，ITS及5.8S序列總長為748.843bp，變異位點(包含缺失)共有119個，簡約信息位點18個；其中ITS-1全長為367-370bp，變異位點14個，簡約信息位點9個；ITS-2長度為228-320 bp(其中冠狀冠環(huán)線蟲有92bp的長片段缺失)，變異位點105個，簡約信息位點9個；5.8S全長均為153bp，且序列完全一致。序列組成分析

4、表明，ITS-1序列的G+C含量(48.00-48.50％)明顯高于ITS-2序列(37.70-40.30％)；冠環(huán)屬5條序列ITS序列多態(tài)性位點共出現5處，2處分別在ITS-1比對總長的106位和168位，3處分別在ITS-2比對總長的172位、220位和310位。
　　經過序列兩兩比對分析得知，3種冠環(huán)屬圓線蟲ITS-1的種間差異性為1.89-2.71％，ITS-2的種間差異性為5.66-31.88％。同時，將測得的5條序列提

5、交到Genbank，并獲得了序列登錄號(JN786948-JN786951)。將本研究獲得的序列與Genbank相應種的序列兩兩比對分析，得到3種冠環(huán)線蟲ITS序列的差異性范圍為0-0.83％。ITS序列的種間變異程度大于種內變異程度，且差異顯著，說明ITS序列可以作為鑒定冠環(huán)屬線蟲的可靠的分子遺傳標記。以微小杯冠線蟲為外群，用本研究獲得的5條序列與從Genbank獲得的3條序列為數據基礎，用鄰接法和最大簡約法構建系統發(fā)育樹。結果顯示，