褐飛虱體內(nèi)HimetobiP病毒的組織定位及其生理功能的初步研究.pdf

1、Himetobi P病毒(Himetobi P virus,HiPV)是一種感染稻飛虱的單鏈RNA病毒,隸屬小RNA病毒目(Picornavivales)雙順反子病毒科(Dicistroviridae)蟋蟀麻痹病毒屬(Cripavirus)的顆粒體病毒,1992年于灰飛虱種群中首次被分離出來。而對(duì)于該病毒在褐飛虱上的攜帶情況,感染褐飛虱的途徑及對(duì)褐飛虱生長發(fā)育等的影響尚不清楚。本研究測(cè)定了稻飛虱不同地理種群體內(nèi)攜帶HiPV的情況,HiP

2、V在褐飛虱體內(nèi)的組織定位及其在褐飛虱體內(nèi)的增殖動(dòng)態(tài),并利用RNA干擾的方法研究了HiPV對(duì)褐飛虱生長發(fā)育的影響。獲得以下結(jié)果:
　　(1)稻飛虱不同地理種群內(nèi)HiPV的檢測(cè)。對(duì)10個(gè)地理種群的褐飛虱、5個(gè)地理種群的白背飛虱、1個(gè)地理種群的灰飛虱進(jìn)行HiPV檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),3種稻飛虱16個(gè)地理種群均攜帶HiPV。通過比對(duì)克隆的16個(gè)地理種群稻飛虱HiPV衣殼蛋白片段的序列,建立了供試16個(gè)地理種群稻飛虱中HiPV的分子進(jìn)化樹,發(fā)現(xiàn)其聚類

3、與宿主種類及地理來源無明顯的相關(guān)性。
　　(2)褐飛虱體內(nèi)HiPV的組織定位。利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng),成功構(gòu)建了pGEX-6P-1-HiPV表達(dá)載體,通過優(yōu)化表達(dá)條件、純化表達(dá)產(chǎn)物及多克隆抗體制備的方法,獲得了HiPV病毒的多克隆抗體。利用HiPV病毒抗體對(duì)褐飛虱的卵巢、精巢、中腸、馬氏管、后腸、唾液腺和脂肪體進(jìn)行免疫組化檢測(cè),并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)這些組織中HiPV的相對(duì)含量進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)HiPV主要定位于褐飛虱中腸末端

4、、馬氏管及后腸;精巢、唾液腺及脂肪體中也有分布;卵巢中含量最少。
　　(3)褐飛虱體內(nèi)HiPV的增殖動(dòng)態(tài)。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)了不同發(fā)育階段及不同性別褐飛虱體內(nèi)HiPV的相對(duì)含量,發(fā)現(xiàn)HiPV相對(duì)含量隨褐飛虱齡期增加而增加,其中在成蟲期驟增且含量達(dá)到最大。此外,褐飛虱雄蟲成蟲體內(nèi)HiPV含量高于雌蟲。
　　(4)HiPV對(duì)褐飛虱的生長發(fā)育的影響。通過RNA干擾的方法,研究了HiPV對(duì)褐飛虱及其子代生殖發(fā)育的影響。結(jié)果表

5、明,對(duì)褐飛虱進(jìn)行HiPV的RNA干擾后,褐飛虱發(fā)育歷期無變化,且其死亡率與對(duì)照間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。其中3齡若蟲對(duì)HiPV的干擾效果反應(yīng)最明顯,而4齡若蟲干擾效果最持久,5齡若蟲干擾效果不明顯。此外,RNA干擾后褐飛虱子一代卵期至3齡若蟲期體內(nèi)HiPV相對(duì)含量呈減少趨勢(shì),與對(duì)照組的趨勢(shì)相反。
　　綜上所述,褐飛虱、白背飛虱、灰飛虱三種稻飛虱自然種群體內(nèi)均含有HiPV,其中在褐飛虱體內(nèi)不同組織中含量不同,以中腸末端中含量最高,而在卵