甘藍(lán)型油菜不同硼效率品種BnNIP6;1s基因的克隆及其表達(dá)研究.pdf

1、硼是植物生長發(fā)育所必需的微量營養(yǎng)元素之一。甘藍(lán)型油菜（BrassicanapusL.）需硼較多，對缺硼敏感。本課題采用同源克隆的方法分離得到硼高效品種青油10號和硼低效品種Westar10中硼轉(zhuǎn)運子AtNIP6;1的同源基因，并對不同硼處理兩個品種苗期和花期不同部位BnNIP6;1s的表達(dá)譜進(jìn)行了分析。主要獲得以下研究結(jié)果:
　　1.利用同源克隆法分離得到青油10號4個AtNIP6;1同源基因，Westar10中3個AtNIP6;

2、1同源基因。通過與擬南芥、白菜和甘藍(lán)中AtNIP6;1同源基因的比對和進(jìn)行進(jìn)化分析，將BnNIP6;1s分為兩組，并分別命名為BnNIP6;1-1a、BnNIP6;1-1c、BnNIP6;1-2a、BnNIP6;1-2c，其中BnNIP6;1-1a和BnNIP6;1-1c與白菜染色體A02上的同源基因同源性更高，BnNIP6;1-2a和BnNIP6;1-2c與白菜染色體A07及甘藍(lán)染色體C06上的同源基因同源性更高。同一品種BnNIP6

3、;1s上游序列和內(nèi)含子長度上有較大差異，但編碼區(qū)序列差異很小。兩個品種同一基因相似性為98.11％-100％，氨基酸序列相似性為94％-100％。上游序列和氨基酸序列比對結(jié)果都表明BnNIP6;1-2a和BnNIP6;1-2c與AtNIP6;1相似度較高。
　　2.對土培盆栽試驗青油10號和Westar10不同時期不同硼水平不同部位BnNIP6;1s的表達(dá)量進(jìn)行RT-PCR分析，結(jié)果表明兩個品種苗期三個硼水平BnNIP6;1s都主

4、要在下部葉表達(dá)。輕度缺硼(B2:HWSB0.25mg/kg)和正常硼(B3:HWSB1.0mg/kg)處理BnNIP6;1-2a和BnNIP6;1-2c表達(dá)量均顯著高于BnNIP6;1-1a和BnNIP6;1-1c?；ㄆ趦蓚€品種BnNIP6;1主要在莖中表達(dá)，其它部位表達(dá)量較少;嚴(yán)重缺硼(B1:HWSB0.1mg/kg)時兩個品種莖中BnNIP6;1s表達(dá)量無顯著性差異，輕度缺硼和正常硼青油10號BnNIP6;1s表達(dá)量顯著高于West

5、ar10。
　　3.對土培盆栽試驗青油10號和Westar10不同硼處理花期莖和花中若3BnNIP6;1s同源基因的表達(dá)進(jìn)行RT-qPCR分析，結(jié)果表明花期兩個品種莖和花中BnNIP6;1s具有不同的表達(dá)模式。缺硼處理青油10號莖和花中BnNIP6;1s表達(dá)量均顯著增加;Westar10莖中BnNIP6;1s表達(dá)量均降低，花中BnNIP6;1s無顯著變化。缺硼處理青油10號花期莖和花中BnNIP6;1-1c、BnNIP6;1-2a