2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究表明植物細胞質雄性不育( Cytoplasmic Male Sterility, CMS)主要與線粒體基因(Mitochondrial DNA, mtDNA)有關。本研究摸索建立了高純度線粒體DNA提取純化的技術體系,分析16個線粒體基因及1個線粒體基因片段orf141在甘藍型油菜細胞質雄性不育系H526A及其可育雜交組合的表達量,為闡明油菜線粒體雄性不育的分子機制提供了基礎。主要研究結果如下:
   (1)甘藍型油菜高純度

2、線粒體DNA提取技術體系的建立:通過比較不同處理對mtDNA得率及質量的影響,優(yōu)化實驗方法,建立了一套高效率高質量的線粒體DNA提取體系。取生長7d的甘藍型油菜幼苗用勻漿器徹底磨碎,勻漿液采用1層紗布粗濾,4層100目的尼龍網過濾,收集濾液。3,000g離心15min,分離破碎組織,17,000g離心15min分離線粒體,收集沉淀。懸浮沉淀,3。000g離心10min,取上清。加入DNaseⅠ室溫酶切30min,后轉入4℃酶切1h,加入

3、EDTA終止酶切反應。18,000g離心20min富集線粒體,沉淀即為粗制線粒體。選擇蔗糖濃度為1.45M和1.2M的溶液,按照1:1(v/v)的比例鋪制不連續(xù)密度梯度,并將粗制線粒體懸浮在此密度梯度上,72,000g超速離心90min,收集蔗糖分界處的樣品環(huán)帶。將收集的樣品經20,000g離心20min,沉淀即為高純度的線粒體。SDS-蛋白酶K裂解后,分離純化mtDNA。通過建庫測序、紫外分光光度計、瓊脂糖凝膠電泳、酶切驗證等手段對提

4、取的mtDNA進行濃度和純度分析,表明采用本實驗體系提取的mtDNA質量好、純度高,足以滿足后續(xù)的酶切、PCR、基因克隆、基因組測序等后續(xù)分子生物學研究。
   (2)甘藍型油菜細胞質雄性不育系的線粒體基因表達分析:采用由原生質體融合雜種不育株培育而得到的細胞質雄性不育系H526A和其對應的可育雜交組合F1,提取其花和蕾的RNA,反轉錄成cDNA。實時定量RT-PCR分析表明:orf222基因及其基因片段orf141在不育系H5

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